肌纖維類型轉(zhuǎn)化通路CaN-NFAT相關(guān)基因的表達(dá)分析及CAML基因的分離鑒定.pdf

1、動物體內(nèi)的肌肉主要分為三類:骨骼肌,心肌和平滑肌,其中骨骼肌約占身體的40％-60％,而骨骼肌是由大量功能不同的纖維類型組成的。因此,豬肉中不同類型肌纖維的構(gòu)成比例以及數(shù)量的差異,必將會影響肌肉的品質(zhì)。在過去的研究中,已經(jīng)形成了對肌肉纖維類型進(jìn)行分類的較為成熟的方法,研究結(jié)果表明可將肌纖維分為四種類型,并用MyHC(myosin heavy chain)Ⅰ,Ⅱa,Ⅱx以及Ⅱb來對不同類型纖維進(jìn)行標(biāo)記,且多項(xiàng)研究表明Ⅰ、Ⅱa型纖維含量比例

2、的增大會使肉質(zhì)朝偏好的方向發(fā)展。研究表明生物學(xué)通路CaN/NFAT對肌纖維類型的轉(zhuǎn)化起到關(guān)鍵的作用。當(dāng)細(xì)胞質(zhì)中鈣離子濃度增加并達(dá)到激活calcineurin的閾值時(shí),能激活下游的轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)而調(diào)節(jié)MyHCⅡb向Ⅱa型纖維轉(zhuǎn)化。為了研究影響肌肉纖維類型的基因通路中基因表達(dá)規(guī)律,發(fā)現(xiàn)并分離差異表達(dá)基因,開展了CaN/NFAT通路中相關(guān)基因的表達(dá)規(guī)律研究以及通路中CAML基因的分離鑒定,結(jié)果如下:
　　 1、以120日齡大白,通城背最

3、長肌為研究對象,比較了四種肌纖維類型在兩個(gè)品種間的相對表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,MyHCⅠ,Ⅱa在大白中的表達(dá)量低于通城豬中的表達(dá)量,而MyHCⅡb在大白豬中的表達(dá)量高于通城豬。實(shí)驗(yàn)結(jié)果在一定程度上揭示了通城豬的肉質(zhì)優(yōu)于大白豬的因?yàn)椤?br>　　 2、取大白豬同一個(gè)體的心、肝、脾、肺、腎、子宮、卵巢、脂肪、半腱肌、股二頭肌、咬肌、背最長肌等組織,采用RT-PCR的方法,對通路各基因進(jìn)行了組織表達(dá)譜分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,各基因在各組織中廣泛表

4、達(dá),這與CaN/NFAT通路廣泛與多項(xiàng)生理活動的事實(shí)是相符合的。
　　 3、運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR的方法,檢測了CaN/NFAT通路中5個(gè)基因在大白豬和通城豬出生后3天、21天、35天、60天、90天和120天六個(gè)不同生長發(fā)育階段背最長肌的基因表達(dá)情況,結(jié)果表明在某些階段品種間呈現(xiàn)顯著或極顯著差異。
　　 4、以120日齡大白背最長肌(快肌)和半腱肌(慢肌)為材料,比較了通路中各基因在快慢肌之間的相對表達(dá)量。結(jié)果顯示,CAM

5、L,NFATc1在半腱肌中的表達(dá)量高于其在背最長肌中的表達(dá)量,而SERCA2α,CnAβ,MEF2D在背最長肌中的表達(dá)量較高。
　　 5、分離克隆了CAML基因的全部ORF以及部分5’和3’非翻譯區(qū)共1683bp的cDNA序列,并對該基因編碼的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行了預(yù)測。對該基因編碼的蛋白序列在不同物種間進(jìn)行同源性比較的結(jié)果表明,豬的該蛋白序列與人,小鼠,大鼠,牛,猩猩,犬的相似性分別為91％,85％,82％,92％,91％,93％。