唐山地區(qū)雞致病性大腸桿菌的分離鑒定、毒力因子分析及滅活疫苗的研制.pdf

1、雞大腸桿菌病是由某些血清型的病原性大腸埃希氏菌引起的一類傳染病的總稱,主要包括氣囊炎、敗血癥、臍炎、輸卵管炎、腹膜炎及大腸桿菌肉芽腫等,嚴重威脅著養(yǎng)雞業(yè)的健康發(fā)展。近年來,通過對唐山地區(qū)規(guī)?；B(yǎng)雞場及獸醫(yī)門診就診病例的病原學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),在規(guī)模養(yǎng)雞場的常發(fā)細菌性傳染病中大腸桿菌病位居首位,而且由于大腸桿菌血清型復(fù)雜,耐藥菌株不斷增加,給防治工作帶來了巨大困難。本研究從唐山地區(qū)發(fā)病雞群中分離鑒定了75株常見致病性大腸桿菌,檢測了分離菌株的致病

2、性和耐藥性,分析了高致病性菌株毒力因子基因出現(xiàn)頻率,明確了優(yōu)勢血清型,并在此基礎(chǔ)上進行了多價滅活疫苗的研究。
　　 通過分離培養(yǎng)、顯微鏡檢查和生化試驗等方法,從唐山地區(qū)多個規(guī)模化養(yǎng)雞場的發(fā)病雞中分離鑒定了75株病原性大腸桿菌,確定了40個分離株的血清型,即:O78、O93、O26、O86、O15、O109、O88、O89、O11和O1,其中O78(11株)、O93(9株)、O26(8株),占分離株總數(shù)的70.0％。用75株分離菌

3、株接種的培養(yǎng)物分別肌肉注射15日齡AA雛雞0.2 mL/羽,均能導(dǎo)致試驗雛雞出現(xiàn)大腸桿菌病的臨床癥狀和剖檢病變,其中高致病性菌株有15株,中度致病性菌株有43株,低致病性菌株有17株,分別占試驗菌株總數(shù)的20.0％,57.3％,22.7％。通過藥敏實驗發(fā)現(xiàn),分離的大腸桿菌耐藥性相當(dāng)普遍,僅對頭孢哌酮、丁胺卡那、頭孢曲松等藥物具有較高的敏感性。通過PCR技術(shù),擴增15株高致病性大腸桿菌的6種毒力因子基因,結(jié)果毒力基因出現(xiàn)頻率較高的為血清增

4、強存活因子(iss,93.3％)、氣桿菌素基因之一(iucD,73.3％)和溫度敏感血凝素(tsh,60.0％),其次是毒力島主要結(jié)構(gòu)基因之一(irP2,40.0％)、空泡轉(zhuǎn)運毒素(vat,26.7％)和熱穩(wěn)定腸毒素(astA,26.7％),基因表型iss/iucD/tsh可以作為致病性大腸桿菌的毒力標(biāo)志。根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍械母咧虏⌒源竽c桿菌優(yōu)勢血清型,制備多價大腸桿菌油乳劑滅活苗,以雛雞0.2 mL/羽,成雞0.5 mL/羽的免疫劑量進行免