烏蘇里擬鲿(Pseudobagrus ussuriensis)不同群體間的遺傳多樣性比較研究.pdf

1、烏蘇里擬鲿(Pseudobagrus ussuriensis)隸屬于硬骨魚綱(Dsteichthyes)、輔鰭亞綱(Actinopteri)、鲇形目(Silurformes)、鲿科(Bagxidae)、擬鲿屬(Pseudobagrus),因其肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、營養(yǎng)價(jià)值高而備受青睞。然而隨著濫捕現(xiàn)象和環(huán)境污染日趨嚴(yán)重,其野生資源數(shù)量銳減；另一方面,由于野生親本數(shù)量有限,普遍存在近親繁殖現(xiàn)象,從而可能導(dǎo)致種質(zhì)退化。
　　 本文從基

2、因組DNA、mtDNA基因片段等多個(gè)層次研究了烏蘇里擬鱔不同群體間的遺傳多樣性,初步篩選了烏蘇里擬鲿的性別相關(guān)分子標(biāo)記并對(duì)其線粒體控制區(qū)做了初步的研究。具體研究結(jié)果包括如下3個(gè)方面:
　　 (1)采用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)烏蘇里擬鲿東北黑龍江水系野生群體(DB)、洪澤湖野生群體(HL)、淮安養(yǎng)殖群體(HA)、蘇州養(yǎng)殖群體(SZ)進(jìn)行了遺傳多樣性分析。從不同的引物組合中篩選出12對(duì)條帶清晰、重復(fù)性強(qiáng)、多態(tài)性好的引物組合,每組引物對(duì)

3、烏蘇里擬鲿4群體擴(kuò)增均產(chǎn)生11～21個(gè)擴(kuò)增位點(diǎn),片段大小在572～111bp,從4個(gè)群體中共擴(kuò)增出212個(gè)位點(diǎn),其中多態(tài)位點(diǎn)有130個(gè),多態(tài)位點(diǎn)比例為64.36％,顯示了較高的多態(tài)性。野生DB群體、HL群體、與養(yǎng)殖HA群體、SZ群體的多態(tài)位點(diǎn)比例分別為:65.67％,63.13％,56.54％,54.88％；Nei's基因多樣性指數(shù)(H)為0.2597、0.2641、0.2546、0.2469;Shannon's信息指數(shù)(Ⅰ)為0.40

4、97、0.4118、0.4050、0.3861。兩個(gè)野生群體間的遺傳距離最大(0.1924),遺傳相似度最小(0.6718),兩個(gè)養(yǎng)殖群體間的遺傳距離最小(0.1087),遺傳相似度最大(0.8970)。UPGMA聚類圖顯示:HA群體和SZ群體首先聚類為一個(gè)分支,再與HL群體聚為一支,最后與DB群體聚類在一起。結(jié)果表明:2個(gè)野生群體的遺傳距離最大,親緣關(guān)系最遠(yuǎn),存在明顯的遺傳分化；養(yǎng)殖群體遺傳多樣性水平較低,且存在較為明顯的遺傳分化趨勢(shì)

5、；但從遺傳距離及遺傳分化的角度分析,人工養(yǎng)殖群體還沒有形成獨(dú)立的遺傳結(jié)構(gòu)。
　　 (2)利用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)烏蘇里擬鲿雌雄基因組DNA的多態(tài)性進(jìn)行了檢測(cè),并篩選與其性別相關(guān)的分子標(biāo)記。8對(duì)引物組合在烏蘇里擬鲿雌雄群體中共檢測(cè)到164個(gè)位點(diǎn),其中雌性個(gè)體142個(gè)位點(diǎn),多態(tài)位點(diǎn)(AP)85個(gè),多態(tài)位點(diǎn)比例(P)為55.19％,平均等位基因數(shù)(Na)為1.5519、平均有效等位基因數(shù)(Ne)為1.3001、Nei’s基因多樣性指

6、數(shù)(H)為0.1797、Shannon's信息指數(shù)(Ⅰ)為0.2732:8對(duì)引物組合檢測(cè)到雄性個(gè)體154個(gè)位點(diǎn),多態(tài)位點(diǎn)102個(gè),多態(tài)位點(diǎn)比例(P)達(dá)到66.23％,平均等位基因數(shù)(Na)為0.6623、平均有效等位基因數(shù)(Ne)為1.3113、Nei's基因多樣性指數(shù)(H)為0.1887、Shannon's信息指數(shù)(Ⅰ)為0.2917,表明雄性烏蘇里擬鱗群體的遺傳多樣性要比雌性群體豐富,遺傳變異比雌性群體大。通過分析8對(duì)引物組合的SR

7、AP擴(kuò)增圖譜,得到一條與雄性相關(guān)的SRAP分子標(biāo)記F10R6-215bp以及雌性個(gè)體特異性SRAP分子標(biāo)記F8R7—450bp。
　　 (3)對(duì)烏蘇里擬鲿線粒體控制區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增并與圓尾擬鲿、長(zhǎng)吻鮠、光澤黃顙魚和大鰭鳠mtDNA控制區(qū)序列進(jìn)行比較。結(jié)果表明:烏蘇里擬鲿的ETAS序列為TACATTAATTTACTATGGTATAGT；中央保守序列區(qū)CSB—F的序列為ATGTAGTAAGAAACCATCAACCCTGTAT,它是終止序列

8、區(qū)和中央保守序列區(qū)的分界點(diǎn),CSB-E的序列為:AGGGGCAAAACTTGTGGGGG,在這個(gè)序列中存在一個(gè)GTGGGG-box的穩(wěn)定結(jié)構(gòu),CSB-D的序列為:TATTACTGGCATCTGGTTCCTA；保守序列區(qū)CSB-1的序列為:ATAATATATGTATGTCTTAATGACATA,其識(shí)別的關(guān)鍵序列為ACATA,CSB-2序列為AAACCCCCCTACCCCC,CSB-3序列為TGTTAAACCCCTAAACCAG,其中,CS