不同產(chǎn)地玄參的遺傳多樣性研究.pdf

1、目的：本研究旨在運(yùn)用近紅外光譜、DNA條形碼和ISSR分子標(biāo)記三種技術(shù)從玄參成分含量和遺傳兩方面對(duì)不同產(chǎn)地栽培玄參進(jìn)行多樣性分析，為玄參產(chǎn)地鑒別、優(yōu)良種質(zhì)的培育、藥材的規(guī)范化栽培和可持續(xù)發(fā)展提供研究基礎(chǔ)。
　　方法：（1）實(shí)驗(yàn)前期查閱相關(guān)文獻(xiàn)，了解玄參的生物學(xué)特性、產(chǎn)地分布和市場(chǎng)行情等基本情況。在初步了解玄參的基本情況后，進(jìn)行產(chǎn)地走訪調(diào)查和樣品采集。（2）采集到14個(gè)不同產(chǎn)地的28份玄參藥材或飲片，進(jìn)行干燥、打粉、過(guò)篩，裝瓶壓實(shí)，

2、設(shè)置相關(guān)參數(shù)進(jìn)行近紅外光譜掃描。（3）采集到10個(gè)省市22個(gè)不同產(chǎn)地93份玄參的新鮮葉片，用DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取，得到樣品的總DNA，用ITS2序列和psbA-trnH序列的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物送檢測(cè)序，用CodonCode Aligner軟件進(jìn)行序列拼接，用MEGA6.06、DnaSP軟件對(duì)最終序列進(jìn)行分析。（4）將不同產(chǎn)地和不同單倍型的玄參樣品共33份進(jìn)行總DNA提取和純度檢測(cè)，確定PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序，尋找能擴(kuò)增

3、玄參DNA的ISSR隨機(jī)引物及對(duì)各引物的最佳退火溫度進(jìn)行梯度篩選，用正交實(shí)驗(yàn)篩選PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系各底物最適宜的濃度，用瓊脂糖凝膠電泳方法檢測(cè)結(jié)果，將最終得到的條帶進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和聚類(lèi)分析。
　　結(jié)果和結(jié)論：（1）近紅外光譜實(shí)驗(yàn)中找到了有關(guān)不同產(chǎn)地玄參的特征光譜，能區(qū)分長(zhǎng)江以南和以北產(chǎn)地的玄參樣本，說(shuō)明玄參內(nèi)在的成分和含量在長(zhǎng)江以南和以北區(qū)域可能產(chǎn)生了差別，但此結(jié)論還需增加樣本量來(lái)進(jìn)一步證明。不過(guò)近紅外光譜分析技術(shù)在玄參藥材化學(xué)多樣性的

4、應(yīng)用上還是具有較好的前景。（2）93份玄參樣品的ITS2序列共產(chǎn)生10個(gè)單倍型，其中A1和A2單倍型頻率分別為63.44％和12.90%，是頻率最高的兩種，分布范圍最廣，代表了絕大部分產(chǎn)地玄參 ITS2這個(gè)片段的遺傳特征。psbA-trnH序列屬于母系遺傳，能很好地體現(xiàn)母本特性，所有樣品共產(chǎn)生4種單倍型，其中C1和C2單倍型相近，且浙江產(chǎn)地的玄參樣品的單倍型均為C1和C2，說(shuō)明大部分產(chǎn)地的玄參與道地藥材浙玄參來(lái)自于同一母本。對(duì)全部樣品的

5、 ITS2序列進(jìn)行分析，各居群的總遺傳分化系數(shù) Gst為0.70536，基因流Nm為0.08；對(duì)psbA-trnH序列分析結(jié)果是：各居群的總遺傳分化系數(shù)Gst為0.89007，基因流Nm為0.06，說(shuō)明各群體間基因交流水平很低，遺傳分化現(xiàn)象嚴(yán)重。（3）ISSR分子標(biāo)記最終采用了13條引物，共擴(kuò)增出137個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)109個(gè)，多態(tài)位點(diǎn)百分率為79.56%，平均每條引物擴(kuò)增條帶數(shù)為10.5條，當(dāng)聚類(lèi)圖距離為21.5時(shí)，所有產(chǎn)地樣品