茉莉酸處理下興安落葉松針葉cDNA文庫的構(gòu)建及EST分析.pdf

1、為研究興安落葉松(Larix gmelinii)誘導(dǎo)抗蟲性的分子機(jī)理,首次以茉莉酸誘導(dǎo)處理后的興安落葉松針葉為試驗(yàn)材料,利用CreatorTM SMARTTM cDNA Library ConstructionKit構(gòu)建了cDNA文庫。從文庫中隨機(jī)挑選單克隆測(cè)序,用表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)方法研究茉莉酸誘導(dǎo)下興安落葉松針葉基因的表達(dá)。
　　 從針葉中提取總RNA合成雙鏈cDNA,連接到質(zhì)粒載體pDNR-LIB上,采用電穿孔法將重組

2、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到DH5α中。經(jīng)文庫質(zhì)量鑒定表明:文庫庫容為5×106,插入片斷分布在0.5～2kb之間,平均大小為1kb左右,重組率達(dá)到95％,表明已成功構(gòu)建了高質(zhì)量的茉莉酸誘導(dǎo)處理后興安落葉松針葉全長cDNA文庫。
　　 從文庫中隨機(jī)挑選980個(gè)序列測(cè)序,共得到812條Unigene,包含62個(gè)序列重疊群(Contig)和750條Singletons。利用Blast與NCBI上的GenBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行同源比對(duì)分析,和公共數(shù)據(jù)庫Nr

3、庫比對(duì)得到注釋的有504個(gè)Unigene,其中已知功能或推測(cè)功能的序列138條,已知序列但未知功能的ESTs為575條,其余的99條未得出對(duì)比信息。將得到的750條非重復(fù)序列與GenBank中已知序列比對(duì),獲得了如植物苯丙氨酸解氨酶、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、熱休克蛋白等與植物抗蟲性相關(guān)的基因,這些基因的匹配度均在95％以上。
　　 茉莉酸誘導(dǎo)處理興安落葉松針葉cDNA文庫的構(gòu)建及EST分析為進(jìn)一步研究興安落葉松在茉莉酸誘導(dǎo)下基因的