“梨銹水病”病原菌的鑒定及分子生物學分析.pdf

1、梨銹水病是我國梨樹上一種新的細菌性病害，最早在江蘇徐淮地區(qū)發(fā)現(xiàn)，近年在浙江、山東、德州也有發(fā)生。該病發(fā)展迅速，為害性大，常引起植株枝干產(chǎn)生銹水狀潰瘍，葉片產(chǎn)生褐色斑點，最終整株枯死（王能友，2006）。
　　 本文以這種病害為研究對象，開展了梨銹水病病原菌鑒定及其基本生物學特性研究、特異性引物設計等工作，得到以下主要結果:
　　 1.對分離菌進行培養(yǎng)性狀、過敏性試驗、色素分泌觀察和接種實驗檢測。結果顯示，共有58個分離菌

2、株，均無菌株存在色素分泌現(xiàn)象，36個菌株有煙草過敏性反應。將所有菌株在浙江的德清和鸕鳥地區(qū)梨樹上進行接種后，以js4、 js5、js6、js7為代表的30個分離菌株發(fā)病癥狀與自然發(fā)病癥狀完全一致，并且從接種病株上重新分離到了此病原細菌，此30個分離菌株經(jīng)柯赫氏法則證明均為該病的病原菌。各菌株致病力無明顯差異。
　　 2.對這些菌株進行了分子生物學鑒定。將上述30個病原菌株，通過分子檢測等手段，擴增所分離菌株的16S、rDNA-I

3、TS序列區(qū)和測序，通過Genbank數(shù)據(jù)庫比對，結果顯示，30個病原菌株與Dickeya chrysanthemi序列相似性分別為97％和96％，2個菌株與Erwinia pyrifoliae。序列相似性為99％。構建系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，梨銹水病病原菌與Dickeya屬其他種有一定的差異性，應為Dickeya屬的一個新種。
　　 3.特異性引物的構建。通過擴增rDNA-ITS序列區(qū)和比對，設計出梨銹水病病原菌的特異性引物，經(jīng)過特異性

4、引物檢測、靈敏度檢測和實際樣品檢測驗證等步驟，能夠快速準確的將分離菌株同Dickeya chrysanthemi區(qū)分開來。
　　 曾有專家指出，我國發(fā)生的梨銹水病病原菌實為檢疫對象梨火疫或者亞洲梨火疫病原（商明清，1992）;另外由于本病害已經(jīng)被前人檢測為Erwinia屬（邱文等，2010），但是具體為Erwinia屬的哪一個種，一直以來均無相關報道(Hauben.L.et al.，1998)，至今尚無定論。針對以上兩點質疑，我