水稻中與harpinXo互作的蛋白OsHIP26的研究.pdf

1、OsHIP26是本實(shí)驗(yàn)室前期研究中利用酵母雙雜交技術(shù)從日本晴水稻cDNA文庫中得到的能與水稻黃單胞的harpinXoc（hpa1Xoc，也簡寫為hrf2或h2）互作的一個eDNA片段，序列全長528 bp。經(jīng)過序列blast后發(fā)現(xiàn)在水稻、玉米以及毛竹中都存在著OsHIP26的同源序列。
　　 為了進(jìn)一步確證OsHIP26和harpinXoc相互作用，以及兩個作用蛋白中的關(guān)鍵功能域，我們通過設(shè)計不同的缺失片段，將其克隆到相應(yīng)的酵母

2、雙雜交載體上，構(gòu)建成重組載體，轉(zhuǎn)化酵母菌株后把重組載體轉(zhuǎn)入對應(yīng)的酵母茵中后利用酵母雙雜交技術(shù)來檢測不同片段間的的互作。結(jié)果顯示，對于OsHIP26，246 bp-266 bp為互作的關(guān)鍵區(qū)域，缺少這部分的亞克隆都無法與harpinXoc發(fā)生互作。
　　 來自稻黃單胞茵的harpinXoo（hpa1Xoo，也簡寫為hrf1或h1）和harpinXoc一樣都可以和OsHIP26互作。對hrf1的五個缺失片段的研究發(fā)現(xiàn)，只有位于hrf

3、1的277-420 bp的缺失片段C能與OsHIP26互作。該片段中可能存在一個與OsHIP26互作的活性中心。
　　 使hrf1失去過敏反應(yīng)的hrf1 L51P突變體經(jīng)酵母雙雜交顯示存在有自激活活性，這說明，51位氨基酸由L（亮氨酸）改變?yōu)镻（脯氨酸），可能改變了蛋白的高級結(jié)構(gòu)或構(gòu)象，從而使突變體改變了原功能。這一點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)室前人得到的結(jié)果一致。
　　 為研究OsHIP26的亞細(xì)胞定位，選取可以和hrf1互作的Y5片段(