紅掌愈傷組織和再生團塊的發(fā)育及四倍體誘導(dǎo).pdf

1、本文以紅掌（Anthurium andraeanum）葉片和氣生根根段為外植體，分別誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織和再生團塊，并對其分化過程進行了細胞學(xué)和組織化學(xué)比較研究，旨在了解愈傷組織和再生團塊分化過程中細胞學(xué)變化異同及糖類和蛋白質(zhì)在愈傷組織衰老與再生團塊發(fā)生發(fā)育過程中的變化?；钚匝跖c愈傷組織和再生團塊的分化關(guān)系尚不明確，本文探討了愈傷組織和團塊發(fā)育過程中細胞中超氧化物含量、超氧化物歧化酶( SOD)活性、過氧化氫酶(CAT)活性、總谷胱甘肽過氧

2、化物酶(GPX)活性和丙二醛含量變化，明確了其在愈傷組織和再生團塊分化過程中與細胞衰老的關(guān)系．氣生根來源的再生團塊對秋水仙素敏感，本文以其材料，進行了秋水仙素誘導(dǎo)紅掌四倍體的研究，這將為紅掌四倍體和三倍體育種奠定基礎(chǔ)．
　　 1．紅掌氣生根根段再生快繁體系的建立
　　 以紅掌氣生根根段為材料，誘導(dǎo)再生團塊的產(chǎn)生，建立快繁系統(tǒng)．培養(yǎng)基1/2MS+6-BA1.0mg·L1+2，4-D0.6 mg·L-1適于氣生根的保持和繁殖

3、，1/2 MS+6-BA1．Omg·L-1+2，4-D0.2 mg·L-1適于誘導(dǎo)氣生根再生團塊產(chǎn)生，MS+6-BA1.0 mg·L-1+2，4-D0.2 mg·L-1可使再生團塊分化成苗。不論是愈傷組織，還是再生團塊，出現(xiàn)綠色組織是分化所必需的。2，4-D、6-BA濃度及其適當比例、無機鹽濃度在再生團塊的誘導(dǎo)與分化成苗中起著重要作用。
　　 2．葉片來源愈傷組織和氣生根來源再生團塊細胞學(xué)研究
　　 葉片誘導(dǎo)所產(chǎn)生黃綠色

4、、黃色和褐色3種愈傷組織的細胞核質(zhì)比依次減小，細胞排列越來越疏松，細胞質(zhì)變稀薄，細胞形態(tài)逐漸失去完整性，其中黃色和褐色愈傷組織細胞不斷衰老最終死亡．氣生根形態(tài)發(fā)生以間接器官發(fā)生為主，再生團塊由氣生根根段切口皮層細胞分裂和脫分化而來。再生團塊內(nèi)部有密集且分裂旺盛的小細胞團，其細胞為分化的原始組織，是分化產(chǎn)生不定芽的基礎(chǔ)。小細胞團芽的分化發(fā)生方式屬內(nèi)起源，隨著小細胞團的不斷生長，外層細胞逐漸凋亡，最終使分化的芽突出再生團塊再生成苗，再生團塊

5、的形態(tài)發(fā)生過程中，也偶見有少量胚狀體產(chǎn)生．
　　 3．愈傷組織和再生團塊發(fā)育過程中糖和蛋白質(zhì)的組織化學(xué)比較研究
　　 糖的含量及其梯度變化是愈傷組織和再生團塊分化的重要內(nèi)在條件，蛋白質(zhì)含量以及核形態(tài)是否完整是愈傷組織和再生團塊分化的關(guān)鍵。以來源于葉片的4類愈傷組織（黃綠愈傷、深綠愈傷、金黃色愈傷和褐色愈傷）和來源于氣生根的再生團塊為材料，研究糖和蛋白質(zhì)在愈傷組織衰老與再生團塊發(fā)生發(fā)育過程中的變化．經(jīng)石蠟切片PAS和汞溴酚

6、蘭組織化學(xué)染色觀察發(fā)現(xiàn)，糖主要以顆粒狀存在于愈傷組織細胞中，并有明顯的圍核現(xiàn)象，蛋白質(zhì)主要集中于細胞核及其周圍。在黃綠愈傷組織中，糖和蛋白質(zhì)的含量從外向內(nèi)顯著減少；而深綠愈傷組織中梯度變化不明顯。在金黃色愈傷組織中糖含量低且內(nèi)外細胞間梯度??；在褐色愈傷組織中糖散亂分布。在金黃色愈傷組織中，蛋白質(zhì)含量由外向內(nèi)有不明顯的梯度變化；在褐色愈傷組織中蛋白質(zhì)則沒有梯度變化。新生再生團塊細胞中，糖和蛋白質(zhì)含量高且由外向內(nèi)梯度變化顯著，再生團塊膨大過

7、程中，糖和蛋白質(zhì)含量下降且內(nèi)外層細胞間差異不顯著．再生團塊分化過程中，糖主要集中在分裂旺盛的分生細胞團和維管組織周圍細胞中，蛋白質(zhì)則集中于分生細胞團中。在各類愈傷組織和再生團塊中均出現(xiàn)含有類似酚類物質(zhì)的特化細胞。
　　 4．愈傷組織和團塊再生體系衰老指標比較研究
　　 以愈傷組織再生體系的4種愈傷組織和氣生根再生體系的再生團塊為材料，比較了它們之間的超氧化物含量、保護酶活性及丙二醛水平的差異．結(jié)果表明：超氧化物含量、超氧

8、化物歧化酶(SOD)活性及過氧化氫酶(CAT)活性均為黃綠愈傷組織最高，金黃愈傷組織和深綠愈傷組織居中、再生團塊和褐色愈傷組織較低；總谷胱甘肽過氧化物酶( GPX)活性以褐色愈傷組織最高，深綠、金黃和黃綠愈傷組織次之，再生團塊最低；丙二醛(MDA)含量以金黃愈傷組織最高，褐色、黃綠和深綠愈傷組織次之，再生團塊最低．再生團塊分化能力最強，而其細胞中超氧化物含量、MDA含量均比4種愈傷組織低，這說明細胞中自由基含量和細胞膜脂過氧化與細胞分化

9、有一定相關(guān)性．
　　 5．秋水仙素離體誘導(dǎo)紅掌‘亞利桑那’四倍體
　　 紅掌“亞利桑那”再生團塊經(jīng)不同濃度的秋水仙素(0.1，0.2，0.3％)分別處理3，5和7h，然后轉(zhuǎn)入附加6-BA3mg·L-1+2，4-D0.2mg·L-1的MS培養(yǎng)基上．60天后，統(tǒng)計團塊的成活率和再生苗數(shù)．0.3%和7h處理組合顯著降低了再生團塊存活率，但是秋水仙素對再生團塊的分化影響并不顯著．所有處理的四倍體植株的誘導(dǎo)率在0.2%到7.6%．