基于菲律賓蛤仔響應(yīng)模式的DEHP污染物的快速預(yù)警系統(tǒng)的研究.pdf

1、鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯（DEHP）作為最常見的增塑劑，是一種環(huán)境激素，具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性，難降解的特性。隨著塑料制品的大量生產(chǎn)和使用，在造成環(huán)境“白色污染”的同時(shí)，DEHP也不斷進(jìn)入水域環(huán)境。包括 DEHP污染物在內(nèi)的大量的有機(jī)污染物通過各種途徑進(jìn)入海洋環(huán)境，并最終遷移至海洋生物體內(nèi)或富集于底質(zhì)和懸浮物中，對海洋環(huán)境和海洋生物造成極大的危害。但對于 DEHP為代表的環(huán)境激素污染物分子標(biāo)記物的研究卻明顯滯后，只見零星的研究報(bào)道，極大地

2、制約了 DEHP快速檢測預(yù)警體系的建立。
　　本文選擇菲律賓蛤仔（Venerupis philippinarum）全組織和斧足，依據(jù)海洋環(huán)境中DEHP含量測定數(shù)據(jù)，室內(nèi)模擬設(shè)定了0.4mg/L和4mg/L兩個(gè)不同的暴露劑量，調(diào)查了 DEHP在體內(nèi)的時(shí)序積累變化，同時(shí)從基因和蛋白兩個(gè)層次上發(fā)掘DEHP指示的分子標(biāo)記物，以期獲得污染物快速預(yù)警分子標(biāo)記物，研究成果如下：
　?。?）GC-MS聯(lián)用技術(shù)測定菲律賓蛤仔富集 DEHP污染

3、物：無論是高濃度組還是低濃度組的菲律賓蛤仔全組織和斧足中DEHP的濃度的變化模式都是先增加后減少。在0.4mg/LDEHP暴露組，全組織中24h和96h檢測到的DEHP濃度分別為0.166μg/g和0.071μg/g，斧足中則分別為為0.203μg/g和0.104μg/g；高濃度脅迫組，全組織中的響應(yīng)檢測值為2.300μg/g和1.047μg/g，斧足中為1.689μg/g和1.172μg/g。
　?。?）菲律賓蛤仔響應(yīng) DEHP

4、脅迫的免疫相關(guān)分子標(biāo)記物的發(fā)掘：DEHP主要是通過介導(dǎo)活性氧（ROS）和一氧化氮（NO）的產(chǎn)生來調(diào)控高等動(dòng)物的免疫反應(yīng)。在本文中，通過定量 PCR技術(shù)評估了短期急性 DEHP脅迫下菲律賓蛤仔10個(gè)免疫相關(guān)基因的時(shí)序表達(dá)變化模式。結(jié)果表明：檢測的10個(gè)基因在不同的時(shí)間點(diǎn)與對照組均呈現(xiàn)差異表達(dá)，其中谷氨酰胺合成酶（GS），KappaB抑制劑的（IK），轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-1（AP-1），親環(huán)素 A-1（CypA-1），熱休克蛋白90（HSP9

5、0）和超氧化物歧化酶（SOD）6個(gè)基因呈現(xiàn)劑量依賴性的表達(dá)模式；大防御素（BD），谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）和硫氧還蛋白過氧化物酶（TP）的表達(dá)則與DEHP濃度呈現(xiàn)負(fù)相性；溶菌酶（LYZ）則在兩個(gè)DEHP劑量中表現(xiàn)出兩種不同的表達(dá)趨勢。
　?。?）菲律賓蛤仔響應(yīng) DEHP脅迫的血細(xì)胞蛋白標(biāo)記物的識(shí)別：為在蛋白層面上獲得指示 DEHP污染的分子標(biāo)記物，我們分析了上述兩種 DEHP濃度脅迫的菲律賓蛤仔血細(xì)胞全蛋白表達(dá)譜。對其中顯著差

6、異的27個(gè)蛋白點(diǎn)（差異倍數(shù)在1.5以上）進(jìn)行鑒定和表征，其中涉及到糖酵解途徑的6種蛋白和 TCA循環(huán)中的5種蛋白均呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)模式。利用過 qPCR測定了其中的蘋果酸脫氫酶（MDH）的mRNA表達(dá)水平。與乙醇對照組相比，MDH基因 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平均升高。
　?。?）菲律賓蛤仔響應(yīng) DEHP脅迫的斧足蛋白標(biāo)記物的識(shí)別：在暴露實(shí)驗(yàn)過程中，我們觀察到實(shí)驗(yàn)組的蛤仔運(yùn)動(dòng)能力明顯降低，結(jié)合血細(xì)胞蛋白表達(dá)譜分析結(jié)果，我們推測 DEHP可能通