植物抗病信號(hào)物質(zhì)實(shí)時(shí)富集與檢測方法的研究.pdf

1、植物在生長過程中會(huì)受到病原微生物的侵染,在與這些病原體長期斗爭的共同進(jìn)化過程中逐漸形成了一系列復(fù)雜而有效的防御機(jī)制來保護(hù)自身。系統(tǒng)獲得性抗性是植物抵抗病原菌侵襲的復(fù)雜的防御機(jī)制之一,而抗病信號(hào)物質(zhì)在防御過程中起重要的作用。本文研究了一些植物抗病信號(hào)物質(zhì)的富集以及檢測方法,并研究了花生植株在青枯菌侵染下水楊酸、茉莉酸等信號(hào)物質(zhì)應(yīng)答的的變化規(guī)律,研究結(jié)果如下:
　　 1.設(shè)計(jì)組裝了動(dòng)態(tài)吸附裝置,與高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用建立了測定

2、花生植株中痕量揮發(fā)物-茉莉酸甲酯與水楊酸甲酯的定性定量方法。采用Tenax-TA吸附劑吸附揮發(fā)物,0.1％甲酸-甲醇溶液洗脫,洗脫液濃縮后進(jìn)樣。色譜柱為Agilent C18柱(2.1×150mm,5μm、),以甲醇和0.05％甲酸-水為流動(dòng)相,流速300μL／min,梯度洗脫。質(zhì)譜配有三重四級(jí)桿／串聯(lián)線性離子阱,采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)正離子模式測定,內(nèi)標(biāo)法定量。方法簡便快捷,富集效率高,兩種揮發(fā)物的檢出限(S／N=3)分別為2.0μ

3、g／L和20μg／L,定量限(S／N=10)分別為5.0μg／L和50μg／L；在1.0-1000μg／L時(shí)峰面積比與質(zhì)量濃度的線性關(guān)系良好(r>0.98)。
　　 2.利用固相萃取與高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用,測定了花生葉片中三種信號(hào)物質(zhì),水楊酸、茉莉酸以及茉莉酸甲酯。利用丙醇／水,濃鹽酸(體積比為2:1:0.002)和二氯甲烷提取花生葉片中水楊酸與茉莉酸,80％甲醇溶液提取葉片中茉莉酸甲酯,通過C18柱純化和濃縮后,最后利用

4、HPLC-MS／MS來檢測。以甲醇和0.05％甲酸-水為流動(dòng)相,采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)正離子模式測定,外標(biāo)法定量。方法提取效率高,線性及重現(xiàn)性良好,幾種化合物的檢出限在0.005-0.5之間,方法的回收率在67.03％-103.34％。
　　 3.以花生植株為材料,利用前面所建立的方法,檢測了青枯菌侵染下0、3、6、9、12、24、48 h后花生植株葉片中水楊酸、茉莉酸和茉莉酸甲酯的變化情況。對花生植株揮發(fā)性的信號(hào)物質(zhì)茉莉酸甲