灰霉病菌雙組分組氨酸激酶信號(hào)途徑上五個(gè)關(guān)鍵基因的功能研究.pdf

1、雙組分組氨酸激酶(以下簡(jiǎn)稱TCHK)信號(hào)途徑在真菌體內(nèi)參與多種生命活動(dòng),但目前,人們對(duì)灰霉病菌的TCHK信號(hào)途徑還缺乏深入的了解。已有研究表明,二甲酰亞胺類殺菌劑(以下簡(jiǎn)稱DCFs)通過激活TCHK信號(hào)途徑而抑制灰霉病菌生長(zhǎng),但該藥劑具體的作用位點(diǎn)尚不清楚,因此,研究灰霉病菌TCHK信號(hào)途徑對(duì)于了解DCFs的作用機(jī)制有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。
　　 本課題利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的真菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)、通過基因敲除和互補(bǔ)的方法研究了灰霉病菌TCHK

2、途徑上五個(gè)重要元件BOS1、BRRG-1、BOS4、BOS5和BOS2的生物學(xué)功能,結(jié)果發(fā)現(xiàn):1)BRRG-1、BOS4、BOS5和BOS2的敲除突變體均不形成氣生菌絲和分生孢子；BOS5敲除突變體的菌絲嚴(yán)重扭曲畸形、多分枝、頂端膨大。2)藥劑敏感性測(cè)定發(fā)現(xiàn),只有BOS1基因敲除突變體對(duì)DFCs表現(xiàn)抗性,而其它四個(gè)基因敲除突變體對(duì)該類藥劑表現(xiàn)更加敏感；另外,BOS1上點(diǎn)突變可導(dǎo)致病菌對(duì)DFCs產(chǎn)生抗性。3)滲透壓敏感性測(cè)定發(fā)現(xiàn),所有五個(gè)

3、元件的敲除突變體對(duì)NaCl和KCl產(chǎn)生的離子型滲透壓力表現(xiàn)敏感,而對(duì)山梨醇等中性滲透壓力的敏感性無改變。4)氧化壓力敏感性測(cè)定發(fā)現(xiàn),除BOS1以外其他四個(gè)元件的敲除突變體對(duì)H2O2均表現(xiàn)敏感。5)致病性測(cè)定表明,灰霉病菌TCHK信號(hào)途徑上的三個(gè)促分裂原活化蛋白(以下簡(jiǎn)稱MAP)激酶BOS4、BOS5和BOS2與致病性密切相關(guān),這些基因缺失突變體能正常侵染穿透寄主細(xì)胞但不能形成病斑。6)蛋白雜交結(jié)果顯示,在正常培養(yǎng)條件下,BRRG-1、B