大豆疫霉磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)移蛋白PsPITP1功能分析.pdf

1、大豆疫霉（Phytophthorasojae）侵染大豆可引起幼苗猝死和成株的根腐病。自1948年在美國(guó)首次被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，大豆疫霉根腐病已成為世界大豆生產(chǎn)上的主要病害之一，每年給大豆產(chǎn)業(yè)帶來(lái)巨額經(jīng)濟(jì)損失。因此研究和探討大豆疫霉的侵染及致病機(jī)制，對(duì)大豆生產(chǎn)及大豆疫霉病害的防治非常關(guān)鍵。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)及生物信息學(xué)的迅速發(fā)展，卵菌的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)不斷成熟與完善，尤其是大豆疫霉等幾個(gè)疫霉種基因組序列測(cè)序完成后，以外泌蛋白為突破口的卵菌致病機(jī)制的

2、研究取得了長(zhǎng)足進(jìn)展。而RNAi技術(shù)的成熟則為基因功能研究開(kāi)拓了另一條途徑，本實(shí)驗(yàn)將RNAi技術(shù)應(yīng)用于大豆疫霉的功能基因組研究中，研究外泌相關(guān)蛋白PsPITP1的功能及其在侵染過(guò)程中所起的作用。
　　大豆疫霉磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)移蛋白PsPITP1的生物學(xué)預(yù)測(cè)及轉(zhuǎn)錄分析.PITP普遍存在于真核生物細(xì)胞中，能夠結(jié)合并交換一分子的磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol，PI)或磷脂酰膽堿phosphatidylcholine，PC

3、)，并促進(jìn)這兩類(lèi)脂分子在細(xì)胞內(nèi)膜組分間的轉(zhuǎn)移。PITP對(duì)細(xì)胞內(nèi)膜組分間脂類(lèi)的運(yùn)輸和代謝、分泌囊泡的形成和運(yùn)輸、磷脂酶C(phospholipase，PLC)調(diào)節(jié)的信號(hào)傳導(dǎo)等生理生化過(guò)程具有重要的影響。本研究通過(guò)生物信息學(xué)方法從大豆疫霉全基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中挖掘出了一個(gè)PITP基因，分別命名為PsPITP1，通過(guò)與其它真核生物的同源性比對(duì)，發(fā)現(xiàn)其高度保守。利用RNA-sequencing和qRT-PCR等技術(shù)分析了PsPITP1在生活史及侵染各

4、階段的轉(zhuǎn)錄情況，發(fā)現(xiàn)其在侵染階段高度上調(diào)表達(dá)，推測(cè)可能參與侵染過(guò)程。
　　PsPITP1參與調(diào)控大豆疫霉的生長(zhǎng)發(fā)育和致病性.利用PEG-CaCl2介導(dǎo)的大豆疫霉遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)得到三個(gè)PsPITP1沉默突變體。表型分析表明:PsPITP1沉默突變體的生長(zhǎng)速率下降，菌落形態(tài)異常，休止孢萌發(fā)形成的菌絲生長(zhǎng)緩慢且分枝明顯比野生型多。游動(dòng)孢子接種合豐47下胚軸分析發(fā)現(xiàn)突變體致病性顯著下降。
　　PsPITP1參與調(diào)控外泌途徑和寄主的防衛(wèi)