魚類IL-1R及相關(guān)家族成員的分子克隆與功能研究.pdf

1、IL-1R是TIR超家族成員，在IL-1、LPS介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路中發(fā)揮重要作用。本文利用生物信息學(xué)和分子克隆等技術(shù)從模式魚類中鑒定出魚類IL-1RI、DIGIRR、SIGIRR基因，并對(duì)它們的蛋白結(jié)構(gòu)、遺傳進(jìn)化及免疫學(xué)功能進(jìn)行了研究。
　　 論文第一部分首次從Tetraodon nigroviridis鑒定出IL-1RI受體、對(duì)其基因結(jié)構(gòu)、蛋白特征、組織分布、基因功能等進(jìn)行了初步研究。構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒，純化IL-1RI蛋

2、白、制備了多克隆抗體。ELISA實(shí)驗(yàn)證明IL-1RI胞外區(qū)三個(gè)免疫球蛋白能夠結(jié)合配體分子IL-1β，與IL-1RI、IL-1協(xié)同進(jìn)化的計(jì)算結(jié)果相對(duì)應(yīng)。而且抗體封閉IL-1RI后，IL-1介導(dǎo)的免疫反應(yīng)被顯著抑制。論文第二部分首次從模式魚類Tetraodon nigroviridis、Gasterosteus aculeatus、Takifugu rubripe、Oryzias latipes中鑒定出DIGIRR基因，是IL-1R/TLR

3、家族的一個(gè)新成員。與其它IL-1R受體不同的是，DIGIRR具有兩個(gè)免疫球蛋白、一個(gè)Arg-Tyr突變的TIR結(jié)構(gòu)域、以及高爾基體亞細(xì)胞定位的特征。LPS刺激后，DIGIRR的mRNA表達(dá)量顯著升高。體外實(shí)驗(yàn)表明，DIGIRR能夠顯著抑制IL-1β、LPS介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)。而且體內(nèi)DIGIRR被siRNA抑制后，IL-1β誘導(dǎo)的炎癥因子表達(dá)量顯著上調(diào)，這些數(shù)據(jù)充分證明了DIGIRR在IL-1、LPS介導(dǎo)的炎癥信號(hào)通路中是一個(gè)負(fù)調(diào)節(jié)因

4、子。論文第三部分首次鑒定出魚類SIGIRR分子，蛋白結(jié)構(gòu)分析、基因功能實(shí)驗(yàn)等方面都證實(shí)了克隆得到的受體分子是哺乳動(dòng)物SIGIRR的同系物，斑馬魚SIGIRR能夠抑制IL-1、LPS、CpG介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路。
　　 在進(jìn)化上，本文提出一個(gè)IL-1RI、DIGIRR、SIGIRR起源與進(jìn)化的假說，DIGIRR是SIGIRR、IL-1RI之間過渡類型的分子。DIGIRR、SIGIRR起源于同一個(gè)祖先分子IL-1R，經(jīng)過兩次基因