綿羊骨骼肌衛(wèi)星細胞的體外培養(yǎng)和誘導分化.pdf

1、骨骼肌衛(wèi)星細胞是成體肌源性干細胞，在各種成體干細胞研究中越來越受到人們的關注。雖然從一些物種(如小鼠、大鼠和人)的骨骼肌中已經(jīng)成功分離出衛(wèi)星細胞，但對于家畜(如牛、綿羊)的研究卻很少。在家畜轉基因的研究和生產(chǎn)過程中，需要在動物生產(chǎn)之前對轉基因細胞系進行基因表達的鑒定和驗證。因此，家畜骨骼肌衛(wèi)星細胞體外培養(yǎng)模型的建立就顯得特別迫切和重要。
　　 本研究以綿羊骨骼肌衛(wèi)星細胞作為研究對象，重點探討衛(wèi)星細胞的分離、純化及體外培養(yǎng)方法，并

2、對得到的細胞進行鑒定，旨在建立可穩(wěn)定傳代的綿羊衛(wèi)星細胞系及其鑒定方法，為今后綿羊骨骼肌衛(wèi)星細胞在家畜繁育和再生醫(yī)學等相關方面的研究和應用提供實驗依據(jù)。
　　 用兩步酶消化法和差速貼壁法分離和純化綿羊骨骼肌衛(wèi)星細胞，并對其進行鑒定和誘導分化，分析其多能性。結果表明，0.1％I型膠原酶和0.25％胰蛋白酶兩步消化法分離綿羊骨骼肌衛(wèi)星細胞效率較高，含20％FBS+10％馬血清的培養(yǎng)基更有利于綿羊骨骼肌衛(wèi)星細胞的體外培養(yǎng)。
　　

3、 用免疫組化和流式細胞術檢測綿羊骨骼肌衛(wèi)星細胞中幾個標記基因Desmin、α-Sarcomeric Actinin、MyoD1、Myf5和PAX7的表達情況，本研究得到的細胞中這5個基因表達均呈陽性，說明分離得到的細胞為綿羊骨骼肌衛(wèi)星細胞。
　　 為驗證其多能性，將分離得到的衛(wèi)星細胞向成肌、成脂和成骨三個方向誘導。成肌誘導后形成明顯的多核肌管細胞，標記基因MyoG表達陽性，快肌肌球蛋白細胞免疫熒光染色呈陽性；成骨誘導后經(jīng)茜素紅和