牛Meg8基因的克隆、組織表達(dá)及印記狀態(tài)分析.pdf

1、基因組印記是一種表觀遺傳現(xiàn)象,來自親本的等位基因或染色體在發(fā)育過程中產(chǎn)生專一性的加工修飾,導(dǎo)致后代細(xì)胞中兩個親本來源的等位基因有不同的表達(dá)活性,具有這種親本差異性表達(dá)現(xiàn)象的基因稱為印記基因。Dlk1-Dio3區(qū)域是在哺乳動物中相對保守的一個印記基因簇,該區(qū)域內(nèi)的印記基因參與調(diào)控胚胎、胎盤發(fā)育和肌肉形成。Dlk1-Dio3印記區(qū)域在人和鼠中研究的較多,由于基因序列及多態(tài)信息的限制,在牛中相關(guān)報道較少。
　　 本研究選取Dlk1-D

2、io3印記域中在鼠和羊中被鑒定為母源表達(dá)印記的Meg8基因?yàn)檠芯繉ο蟆Ｊ紫炔捎肦T-PCR和RACE方法得到該基因的cDNA序列(Genebank登錄號:HQ407410-HQ407422)。序列分析表明牛Meg8基因至少存在12種可變剪接形式,DNA序列全長約43 kb,cDNA序列全長1062 bp,包括7個外顯子,外顯子表現(xiàn)出與羊高度的相似性(82.8％～97.7％)。牛Meg8基因5'側(cè)翼區(qū)未發(fā)現(xiàn)與Kozak規(guī)則相匹配的翻譯起始

3、序列,推測該基因是一種非編碼RNA,可能作為一種RNA調(diào)解分子調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄。以上研究結(jié)果將為進(jìn)一步分析該基因的生物學(xué)功能以及揭示其分子調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 通過RT-PCR方法分析了Meg8基因在成年牛各個組織中的表達(dá)情況,結(jié)果表明,Meg8基因在成年牛的心、肝、脾、肺、腎、腦、肌肉和脂肪都表達(dá)RNA,未表現(xiàn)出在鼠和羊中所報道的組織特異性。
　　 印記基因的表達(dá)是基于基因的單等位基因表達(dá),為了研究基因是單等位基因

4、表達(dá)還是雙等位基因表達(dá),必須找出一個表達(dá)的多態(tài),并且要求被研究的動物是雜合子,由此能辨別是哪一個親本基因被轉(zhuǎn)錄。哺乳動物基因組中最常見的多態(tài)是SNP,包括DNA點(diǎn)突變,即堿基對的插入或缺失,可以在基因組水平上檢測出這種突變。SSCP技術(shù)是一種簡單、快速、可重復(fù)性好的方法,廣泛用于尋找基因突變和DNA分型。本研究首先應(yīng)用PCR-SSCP方法尋找Meg8基因中表達(dá)的多態(tài),鑒定雜合子,通過RT-PCR及直接測序法分析雜合子牛的心、肝、脾、肺、