玉米ZmCKX1基因的表達(dá)分析和遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、細(xì)胞分裂素是植物生長(zhǎng)過(guò)程中的一類重要激素，細(xì)胞分裂素氧化酶通過(guò)移除細(xì)胞分裂素的N6-異戊二烯鏈產(chǎn)生一個(gè)腺嘌呤和一個(gè)相應(yīng)的不飽和的乙醛-3-甲基-2-丁烯醛，不可逆的降解細(xì)胞分裂素而調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育。本文根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中OsCKX2的基因序列設(shè)計(jì)引物，利用RT-PCR技術(shù)克隆得到從玉米自交系鄭58中克隆了編碼細(xì)胞分裂素氧化酶1(ZmCKX1)的基因。選取授粉前后不同時(shí)間點(diǎn)的玉米自交系及其雜交后代的雌、雄穗，通過(guò)熒光定量PCR方

2、法，分析ZmCKX1基因的表達(dá)分析。并構(gòu)建了ZmCKX1基因的過(guò)表達(dá)和RNA干擾載體，進(jìn)行了玉米幼胚的遺傳轉(zhuǎn)化，主要研究結(jié)果如下：
　　1、ZmCKX1基因閱讀框全長(zhǎng)為1608 bp，編碼535個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)分子量為57 kd，理論等電點(diǎn)pI=5.22。該基因與TaCKX1，AtCKX在核苷酸水平上同源性分別為69％和49％。
　　2、ZmCKX1基因主要表達(dá)在雌穗中，并且隨著授粉時(shí)間的延長(zhǎng)，ZmCKX1在雌穗中的表達(dá)量逐

3、漸升高，在授粉后30 d達(dá)到最高，是雌穗10 d的5倍，雌穗0 d的50倍。并且雜交種中ZmCKX1的表達(dá)量明顯低于親本，ZmCKX1的表達(dá)分析表明：產(chǎn)量越高，ZmCKX1表達(dá)量越低。這表明ZmCKX1的表達(dá)水平與玉米的生長(zhǎng)活力及產(chǎn)量是負(fù)相關(guān)的。
　　3、通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ZmCKX1基因的過(guò)表達(dá)和RNA干擾載體轉(zhuǎn)化500個(gè)玉米幼胚，利用抗性基因Hpt和目的基因PCR檢測(cè)再生的小苗，結(jié)果表明，ZmCKX1已經(jīng)插入到了植物基因組中，