平菇主栽品種DNA甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性(MSAP)分析.pdf

1、我國(guó)為世界食用菌第一生產(chǎn)大國(guó)，食用菌產(chǎn)業(yè)已成為我國(guó)僅次于糧、油、果、菜的第五大產(chǎn)業(yè)。平菇(Pleurotus ostreatus)是我國(guó)產(chǎn)量居第一位的人工栽培食用菌，味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有重要的食藥用價(jià)值。平菇的生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制復(fù)雜，并易受環(huán)境因子影響，在育種、菌種保藏及栽培等方面有許多問題亟待解決。
　　 DNA甲基化參與生物體生長(zhǎng)、分化、衰老、死亡以及抗脅迫能力等幾乎所有的代謝調(diào)節(jié)，對(duì)生物體正常的生長(zhǎng)發(fā)育有重要的調(diào)控作用，是表

2、觀遺傳學(xué)的重點(diǎn)研究?jī)?nèi)容。
　　 本研究以通過國(guó)家認(rèn)定的平菇9個(gè)栽培品種為材料，采用甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性（Methylation Sensitive Amplification Polymorphism，MSAP）技術(shù)對(duì)供試材料基因組DNA進(jìn)行甲基化分析，旨在探究自然狀態(tài)下平菇基因組DNA甲基化的水平和模式，以及溫度脅迫對(duì)DNA甲基化水平及模式的影響，并優(yōu)化和篩選MSAP技術(shù)應(yīng)用于平菇DNA甲基化研究的最適條件與參數(shù)，為后續(xù)深入研

3、究DNA甲基化在食用菌生長(zhǎng)與發(fā)育中，以及食用菌在環(huán)境脅迫響應(yīng)過程中所起到的作用奠定基礎(chǔ)。試驗(yàn)的主要結(jié)果如下:
　　 1.對(duì)文獻(xiàn)中介紹的MSAP技術(shù)的試驗(yàn)條件與參數(shù)進(jìn)行調(diào)節(jié)和優(yōu)化，篩選得到MSAP技術(shù)應(yīng)用于平菇DNA甲基化研究的最適試驗(yàn)條件與參數(shù)，可為后續(xù)食用菌DNA甲基化研究提供依據(jù);
　　 2.采用MSAP技術(shù)對(duì)自然狀態(tài)下9個(gè)品種基因組DNA甲基化水平及模式進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)9個(gè)材料基因組DNA甲基化水平為1.9％～17.

4、2％，平均甲基化比率(P)為8.9％，甲基化在平菇中發(fā)生普遍，品種之間差異明顯。同時(shí)，全甲基化即雙鏈甲基化為平菇基因組DNA甲基化的主要模式;
　　 3.以4℃和40℃為低溫及高溫脅迫條件處理供試材料24h，以25℃為對(duì)照條件，用MSAP技術(shù)分析溫度脅迫對(duì)基因組DNA甲基化水平及模式的影響，發(fā)現(xiàn)溫度脅迫能夠造成基因組DNA發(fā)生甲基化和去甲基化，但突變位點(diǎn)不多。這種甲基化水平及模式的變化是否參與平菇在響應(yīng)溫度脅迫過程中的代謝調(diào)節(jié)還