榮昌豬DNA甲基化水平的差異分析.pdf

1、本試驗(yàn)用高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)檢測了不同體重階段(10kg、20kg、35kg、50kg、80kg、100kg)榮昌豬閹公豬肝臟、心臟和腰大肌三種組織的DNA甲基化水平，探討了這三種組織在不同體重階段基因組DNA甲基化水平的變化規(guī)律，為正確認(rèn)識生長發(fā)育過程中的表觀遺傳調(diào)控作用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。 研究結(jié)果如下： 1．HPLC技術(shù)體系的建立與優(yōu)化

2、 用核酸酶T1純化后的DNA，高溫解鏈后在核酸酶P1和牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)的作用下水解為單一的脫氧核苷混合物，通過2’—脫氧胞苷(dC)、2'—脫氧腺苷(dA)、2’—脫氧鳥苷(dG)、2’—脫氧胸苷(dT)和5-甲基脫氧胞苷(5-mC)五種脫氧核苷混合的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對比，且進(jìn)行了平行試驗(yàn)的測定，各平行組之間變異系數(shù)接近。得出最優(yōu)化的色譜條件為色譜柱：symmetryshieldTM RP18柱(150×3.9mm，5μm)

3、；流動相：0.1％(v/v)磷酸(H3PO4)，并用三乙胺調(diào)pH值為3.0；流速：1.0mL/min；檢測器波長：273nm；柱溫：25℃；靈敏度：2.0000AUFS；進(jìn)樣量20μL。方法簡便可靠，20min內(nèi)可完全分離。 2．基因組DNA甲基化水平在不同生長發(fā)育階段和不同組織間的變化趨勢 DNA甲基化水平表現(xiàn)出隨體重增加逐漸降低的變化趨勢。10kg體重階段DNA甲基化水平極顯著高于其余各體重階段(p＜0.01)；2

4、0kg體重階段DNA甲基化水平極顯著高于80kg、100kg體重階段(p＜0.01)；35kg、50kg和80kg體重階段DNA甲基化水平極顯著高于100kg體重階段(p＜0.01)；其余體重階段間DNA甲基化水平差異不顯著(p＞0.05)。 體重與肝臟、心臟和腰大肌組織中DNA甲基化水平的一元線性回歸方程為：腰大肌y=-0.000241x+0.0419(R2=0.4677)，肝臟y=-0.000174x+0.0363(R2=0