增強UV-B輻射對小麥根系總蛋白的影響.pdf

1、本實驗以“臨豐3號”小麥根為試驗材料，旨在確定適合小麥根部提取的方法與合適的處理天數(shù)，最終找出經(jīng)過UV-B輻射后小麥根中的差異蛋白點并分析其功能。設(shè)置正常光照組(CK)和增強UV-B輻射組(B)(10.08KJ·m-2·d-1)，首先用不同的提取方法(酚提-甲醇/醋酸銨沉淀法法、TCA/丙酮沉淀法、尿素硫脲法)提取處理6天的小麥根部蛋白，通過SDS-PAGE與雙向電泳來比較這三種提取方法，找到適合小麥根部的蛋白提取方法。然后用尿素硫脲法

2、對不同處理天數(shù)(設(shè)置3、6、9天)的小麥幼苗根部蛋白進行提取及SDS-PAGE分析，選取合適的處理天數(shù)。最后應(yīng)用2-DE獲取差異蛋白圖譜，經(jīng)PDquest軟件分析找出差異蛋白點，之后質(zhì)譜鑒定并分析蛋白差異點。結(jié)果表明：
　　 (1)采用尿素硫脲法提取小麥根總蛋白，無論在蛋白條帶數(shù)目，染色深淺等各方面都優(yōu)于酚提一甲醇/醋酸銨沉淀法和TCA/丙酮沉淀法，且經(jīng)過雙向電泳初步分析，尿素硫脲法提取到的蛋白樣品其蛋白點更多，利于后續(xù)實驗，因

3、此在隨后的差異蛋白分析中選擇用尿素硫脲法提取根蛋白。
　　 (2)與實驗處理3天和9天的小麥根比較，實驗處理6天的小麥根中CK組和B組的總蛋白含量變化明顯，且差異極顯著(tck：B=2.145，P<0.01)，因此我們在后續(xù)的雙向電泳實驗中采用輻射6天的小麥根為實驗材料。
　　 (3)通過對比正常組與處理組的2-DE圖譜，發(fā)現(xiàn)差異2倍以上有15個蛋白點，其中2個為新增蛋白點，3個為表達量增加點，10個為表達量下降點。通過