蓖麻矮化相關(guān)RcDof蛋白的純化與晶體生長.pdf

1、蓖麻(Ricinus communis L)是特殊的油料作物，矮稈蓖麻在單產(chǎn)較高、適合密植和機(jī)械化生產(chǎn)等方面具有顯著優(yōu)勢。鋅指蛋白是植物特有的一類轉(zhuǎn)錄因子，種類較多，Dof蛋白含有特異的單鋅指DNA結(jié)合域，在植物生長發(fā)育中起重要作用，參與調(diào)控植株矮化。本試驗(yàn)克隆RcDof基因，利用原核表達(dá)系統(tǒng)對該基因進(jìn)行原核表達(dá)和純化，建立RcDof（44-101）表達(dá)純化體系，獲得大量高純度的融合蛋白，篩選結(jié)晶條件，為RcDof結(jié)構(gòu)與功能的研究及Rc

2、Dof在植物中的作用分子機(jī)制研究提供一定的理論與試驗(yàn)依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1.構(gòu)建pETM-20-RcDof，pETM-30-RcDof，pETM-40-RcDof，pETM-50-RcDof和pETMBP-XE-RcDof(132-303)的原核表達(dá)載體。
　　2.將表達(dá)載體轉(zhuǎn)入BL21（DE3）表達(dá)菌株中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，pETM-20-RcDof，pETM-30-RcDof，pETM-40-RcDof，pETM-50-

3、RcDof所表達(dá)的蛋白均以包涵體的形式存在。嘗試對包涵體進(jìn)行了變復(fù)性純化，但純化結(jié)果無法滿足后續(xù)試驗(yàn)要求，尿素濃度降低后，蛋白不可溶。pETMBP-XE-RcDof(132-303)以可溶的形式存在。
　　3.對RcDof（44-101）蛋白進(jìn)行His親和純化，離子交換和分子篩層析純化，得到高純度的融合蛋白。
　　4.對RcDof(44-101)蛋白結(jié)晶條件進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)其在0.2M Ammonium，0.1M BIS-TR