干旱脅迫下甘藍型油菜消減文庫的構建及分析.pdf

1、干旱是非生物脅迫中對農(nóng)作物生長和產(chǎn)量影響最大的脅迫之一。世界范圍內(nèi)，每年由于干旱脅迫造成的損失相當于其他所有環(huán)境因子造成的總和。油菜干旱災害是我國和其他主產(chǎn)國家經(jīng)常性的自然災害，中度干旱可導致油菜單產(chǎn)降低20%以上，嚴重時甚至絕收。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，油菜耐旱品種在干旱脅迫下生長發(fā)育和產(chǎn)量相對穩(wěn)定，基于分子生物學方法考察其在干旱脅迫條件下的應答機制，將有益于探究其抗旱分子機理，全面理解抗旱性遺傳基礎，對于抗旱新品種培育和抗旱栽培技術研發(fā)具

2、實踐價值。
　　 本研究以甘藍型油菜抗旱品系Q2為材料，用模擬干旱方式誘導基因表達，采用抑制性消減雜交技術(SSH)構建了富含甘藍型油菜Q2根和葉片抗旱相關基因片斷的差減文庫。應用反向Northern雜交技術對文庫進行了篩選，并選取了三個陽性克隆進行了Real-time PCR驗證。對選取的186個陽性克隆進行測序，同源檢索結果顯示，有156個片段能找到與之同源性高的基因?；蚬δ芊诸愶@示，所占比例分別為：1：代謝相關11.1%

3、；3：催化及抗氧化活性10.9%；4：信號轉(zhuǎn)導：10%：5：轉(zhuǎn)錄調(diào)控6.4%；6：轉(zhuǎn)運相關3.8%；7：翻譯調(diào)控：2%；8：蛋白質(zhì)降解1.3%；9：抗性相關：1%；10：能量代謝1%；11：未分類36.4%；12：功能未知16.1%。
　　 就ESTs來源來看，絕大部分來源于擬南芥、甘藍型油菜、甘藍、大白菜、百合等植物。其中，功能分析結果發(fā)現(xiàn)已知功能的ESTs156條主要參與干旱脅迫應答的光合作用及葉綠體結構建成、抗性及防御、膜

4、和轉(zhuǎn)運類、轉(zhuǎn)錄相關功能以及信號轉(zhuǎn)導。獲得與抗旱密切相關的捕光葉綠素A/B結合蛋白、1，5-二磷酸核酮糖羧化酶、過氧化物酶、磷脂酰肌醇轉(zhuǎn)運蛋白、ABC轉(zhuǎn)運子、轉(zhuǎn)錄因子、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、GTP結合蛋白等重要基因的ESTs。這些ESTs基本上反映了干旱脅迫下甘藍型油菜基因的表達譜。
　　 對文庫中獲得的兩個基因B、C(與過氧化物酶同源性很高)及一個未知功能ESTsA基因利用反轉(zhuǎn)錄PCR技術分析其表達情況。發(fā)現(xiàn)A、B、C在干旱脅