錦紫蘇類病毒的遺傳變異及其與寄主之間的關(guān)系.pdf

1、類病毒本身不編碼任何蛋白，而是完全依靠寄主的相關(guān)酶類進(jìn)行自我復(fù)制。錦紫蘇是世界范圍內(nèi)廣泛種植的一種觀賞植物，原產(chǎn)于印度尼西亞，其莖葉繁茂，鮮嫩多汁。錦紫蘇極其容易受到馬鈴薯類病毒科錦紫蘇類病毒屬內(nèi)各種類病毒的侵染。目前為止，世界上共發(fā)現(xiàn)了6種侵染錦紫蘇的類病毒，分別為：錦紫蘇類病毒-1～6（CbVd-1～CbVd-6）。錦紫蘇類病毒侵染錦紫蘇后在某些品種上可能呈潛伏侵染，不引起任何的癥狀，也可能會(huì)在某些品種上引起植株矮化或葉片輕度萎黃等

2、癥狀。所有已發(fā)現(xiàn)的錦紫蘇類病毒具有共同的中央保守區(qū)序列，而且錦紫蘇類病毒具有廣泛重組的特性。雖然CbVd-1已被證明廣泛存在于世界各國(guó)，但其他五種錦紫蘇類病毒的相關(guān)信息卻十分有限，特別是CbVd-5和 CbVd-6，目前還沒有關(guān)于這兩種類病毒生物學(xué)方面的報(bào)道。
　　本研究意在建立兩種錦紫蘇類病毒快速檢測(cè)方法，調(diào)查錦紫蘇類病毒在全國(guó)范圍內(nèi)的發(fā)生和分布情況，并對(duì)其遺傳多樣性進(jìn)行分析，探討錦紫蘇類病毒序列變異和寄主植物品種之間的關(guān)系。本

3、研究中得到的錦紫蘇類病毒序列將豐富GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中類病毒序列相關(guān)信息，本研究的結(jié)果也將為錦紫蘇類病毒重組及致病機(jī)制的闡明打下良好的理論基礎(chǔ)。
　　根據(jù)所有錦紫蘇類病毒具有共同的中央保守區(qū)這一特性，本研究建立了兩種錦紫蘇類病毒快速檢測(cè)方法，分別為Sap-direct RT-PCR法和通用探針快速雜交法。Sap-direct RT-PCR法中，利用移液器直接吸取錦紫蘇莖和葉的汁液作為RT-PCR的模板，根據(jù)錦紫蘇類病毒中央保守區(qū)

4、序列設(shè)計(jì)可以擴(kuò)增所有錦紫蘇類病毒的通用引物，通過一次PCR就可以確定被檢植株是否感染了錦紫蘇類病毒以及感染類病毒的種類。通用探針快速雜交法中，將錦紫蘇類病毒中央保守區(qū)上游的32個(gè)相同的核苷酸序列擴(kuò)增8倍后用于制備檢測(cè)所有錦紫蘇類病毒的通用探針—8CCR探針。該探針可以通過斑點(diǎn)雜交一次性確定樣品中是否攜帶錦紫蘇類病毒，通過Northern雜交技術(shù)可以一次性確定樣品中感染錦紫蘇類病毒的種類。這兩種快速檢測(cè)方法簡(jiǎn)單高效，成本較低，適用于錦紫蘇

5、類病毒的批量檢測(cè)及大規(guī)模調(diào)查，對(duì)其他類病毒，甚至病毒快速檢測(cè)方法的建立也具有借鑒意義。
　　錦紫蘇類病毒疫情普查研究中，從中國(guó)、印度及印度尼西亞共采集888個(gè)錦紫蘇樣品。檢測(cè)結(jié)果表明：CbVd-1和CbVd-5廣泛存在于這三個(gè)國(guó)家中；CbVd-2，CbVd-3和CbVd-6僅在中國(guó)樣品中檢測(cè)到；所有的樣品中均沒有檢測(cè)到CbVd-4。本研究結(jié)果是CbVd-1和CbVd-5在印度尼西亞的首次報(bào)道，CbVd-2和CbVd-3在中國(guó)的首次

6、報(bào)道，也是CbVd-5在印度的首次報(bào)道。
　　錦紫蘇類病毒生物學(xué)活性研究中，利用侵染性克隆技術(shù)，首次確認(rèn)了 CbVd-1、CbVd-3、CbVd-5和 CbVd-6中國(guó)地區(qū)分離物的生物學(xué)活性。研究結(jié)果表明：不同錦紫蘇類病毒在同一種寄主植物中的侵染時(shí)間從45天到300天不等，確認(rèn)了CbVd-5和CbVd-6的生物學(xué)活性，為其分類地位的確立提供了確鑿的分子生物學(xué)證據(jù)。子代序列分析結(jié)果表明：錦紫蘇類病毒的遺傳多樣性不僅與寄主的種類有關(guān)，