小鼠排卵前卵泡閉鎖過程中FSH對FOXO1基因的表達調(diào)控.pdf

1、在哺乳動物整個卵巢的發(fā)育和功能發(fā)揮中，卵泡閉鎖是一個非常精密且周期性進行的過程，閉鎖可以破壞和消除卵巢中的卵泡和卵母細胞。卵泡閉鎖是一個很普遍的生理過程，人類在從胎兒到絕經(jīng)期的發(fā)育過程中估計有99.9％的卵母細胞因閉鎖而被損失掉。當卵泡發(fā)育至排卵前卵泡，若沒有排卵則發(fā)生閉鎖。一般認為出生后的卵泡閉鎖是由于卵泡中的顆粒細胞凋亡引起的，但對于排卵前卵泡的閉鎖機制目前研究的還不是很清楚。本實驗通過對小鼠進行激素處理,使小鼠卵巢中的多數(shù)卵泡能夠

2、在相同的時期同步發(fā)育至排卵前卵泡的階段。由于卵泡排卵需要黃體生成素（LH)的刺激，因此在未使用LH進行刺激的情況下發(fā)育至排卵前卵泡階段的這些卵泡變發(fā)生了閉鎖，從而成功的構(gòu)建了大卵泡閉鎖的模型。通過定量PCR、石蠟切片、凋亡染色、蛋白質(zhì)印跡、染色質(zhì)免疫沉淀和熒光染色等技術(shù)，本實驗研究了在大卵泡閉鎖過程中FSH對卵泡閉鎖的影響以及FSH對顆粒細胞中一些重要調(diào)節(jié)因子的作用，實驗結(jié)果表明:
　　1)通過對在閉鎖過程中不同時期所取得的卵巢切

3、片進行TUNEL染色，結(jié)果表明隨著閉鎖時間的延長，卵泡中顆粒細胞的凋亡也越來越嚴重。在卵泡閉鎖的過程中若對小鼠進行FSH刺激則可抑制閉鎖卵泡中顆粒細胞的凋亡，從實驗結(jié)果中我們還可以看出排卵前卵泡的閉鎖屬于腔部閉鎖類型，卵泡中的顆粒細胞是從最接近卵泡腔部分開始發(fā)生凋亡的。
　　2)運用RT-PCR技術(shù)，本研究對閉鎖卵泡顆粒細胞中Caspase家族成員的表達變化進行了研究，實驗結(jié)果表明在卵泡閉鎖和FSH對閉鎖卵泡的挽救過程中Caspa

4、se-8的表達沒有明顯的變化而Caspase-9和Caspase-3則隨卵泡狀態(tài)的不同表現(xiàn)出不同的表達水平。根據(jù)結(jié)果我們推測顆粒細胞的凋亡可能是由線粒體凋亡通路所介導(dǎo)的。
　　3)通過RT-PCR比較了在閉鎖卵泡和健康卵泡中FoxO1基因的表達水平，結(jié)果表明在閉鎖的卵泡中FoxO1的表達要高于在健康卵泡中。根據(jù)結(jié)果還可以看出FSH對閉鎖卵泡中FoxO1的表達有明顯的抑制作用。FoxO1蛋白表現(xiàn)出與mRNA相同的變化規(guī)律。
　

5、　4)對體外培養(yǎng)的顆粒細胞進行FSH刺激可以促使位于胞核中的ERalpha向胞質(zhì)中轉(zhuǎn)移。通過染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)可以看出在閉鎖卵泡顆粒細胞中ERalpha在FoxO1基因啟動子區(qū)有較多的募集，而在FSH挽救顆粒細胞凋亡的過程中FSH可以抑制ERalpha蛋白在FoxO1基因上的聚集作用。
　　因此，排卵前卵泡發(fā)生閉鎖的部分原因有可能是卵泡顆粒細胞中FoxO1基因表達量的升高以及翻譯后蛋白量的增加，而FSH對閉鎖卵泡的挽救作用有可能是