ZmBT1、ZmAATP基因的克隆及轉(zhuǎn)ShYS、BRi基因玉米植株的獲得與鑒定.pdf

1、玉米作為當(dāng)今世界重要的糧食作物，其籽粒中淀粉含量高達(dá)70％～80％，提高玉米胚乳中淀粉含量有利于增加玉米產(chǎn)量。轉(zhuǎn)基因技術(shù)是改良玉米遺傳性狀，提高玉米產(chǎn)量的重要手段。
　　 在禾本科作物中，淀粉合成的前體ADP－葡萄糖(ADP-Glc)在細(xì)胞質(zhì)中生成，經(jīng)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)到淀粉體內(nèi)參與淀粉合成。通過(guò)增強(qiáng)ADP-Glc進(jìn)入質(zhì)體的轉(zhuǎn)運(yùn)能力，可以有效的提高淀粉合成效率。本研究克隆得到玉米ADP-葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因ZmBT1和玉米ATP-ADP轉(zhuǎn)運(yùn)

2、蛋白基因ZmAATP。ZmBT1蛋白屬于腺苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體系統(tǒng)，在玉米植株內(nèi)組成型表達(dá)。ZmAATP蛋白與ATPase親緣關(guān)系較近，該基因的表達(dá)隨著玉米籽粒的發(fā)育和物質(zhì)積累而逐漸升高。我們分別構(gòu)建了由組成型啟動(dòng)子(Ubi)和胚乳特異型啟動(dòng)子(GluAI)驅(qū)動(dòng)的ZmBT1基因和ZmAATP基因的過(guò)量表達(dá)載體，為進(jìn)一步研究該基因在玉米中的生物學(xué)功能，進(jìn)一步進(jìn)行玉米遺傳改良奠定了基礎(chǔ)。
　　 本研究通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米幼胚轉(zhuǎn)化體系，將修飾

3、后的淀粉合成ADP葡萄糖焦磷酸化酶基因(ShYS)及淀粉分支酶基因的RNAi表達(dá)盒(BRi)成功的轉(zhuǎn)入玉米Q319自交系中。實(shí)驗(yàn)共侵染外植體14661個(gè)，獲得T0代607株成活的轉(zhuǎn)基因植株，最終得到170個(gè)結(jié)實(shí)的T0代轉(zhuǎn)基因株系。從T0代種子中，選擇103個(gè)株系進(jìn)行T1代種植，并對(duì)T1代進(jìn)行考種。PCR檢測(cè)獲得10個(gè)穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)基因株系，其中，ubi：BRi基因型7株，ubi：ShYS基因型3株。選取這10個(gè)株系的種子，在T2代分別在基