柑橘裂皮病毒侵染對(duì)寄主基因表達(dá)的影響研究.pdf

1、柑橘裂皮類(lèi)病毒（Citrus exocortis viroid,CEVd）是對(duì)柑橘生產(chǎn)造成危害的主要致病因子，導(dǎo)致植株矮化、樹(shù)莖減少、裂皮、樹(shù)勢(shì)衰弱和大量落花落果，嚴(yán)重減產(chǎn)，給柑橘生產(chǎn)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究采用基因芯片技術(shù)分析了CEVd強(qiáng)毒株系對(duì)柑橘基因表達(dá)譜的影響，探究CEVd與柑橘互作過(guò)程所影響到的相關(guān)基因，為明確其致病機(jī)理奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
　　1、以具有強(qiáng)毒株系特征的CEVd分子變種CEVd.01為試材，將其二

2、聚體化后進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，機(jī)械接種至以枳殼為砧木的香櫞861嫩芽上，接種3個(gè)月后進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)驗(yàn)證及癥狀觀察。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明接種樣品ZK1、ZK2和ZK3的枳殼苗均獲得了預(yù)期大小的目標(biāo)片段，而陰性樣品CK1、CK2和CK3枳殼苗未檢測(cè)出目標(biāo)片段。將檢測(cè)得到的目標(biāo)片段進(jìn)行回收克隆并測(cè)序，確證CEVd.01接種成功。
　　2、接種成功后，選取陰性對(duì)照植株CK1、接種陽(yáng)性植株ZK1和分離物CEVd.01的毒源植株CK+進(jìn)行差

3、異表達(dá)分析。分別選取三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)相隔31天收集枳殼苗葉片，收集葉片時(shí)對(duì)上中下部的葉片同時(shí)收集混合在一起送交公司進(jìn)行基因芯片分析。結(jié)果顯示CEVd侵染后引起枳殼基因表達(dá)水平的顯著改變，而毒源材料相關(guān)基因的表達(dá)改變水平明顯強(qiáng)于接種材料;其中上調(diào)基因主要涉及植物防御信號(hào)途徑相關(guān)基因;下調(diào)基因主要包括糖類(lèi)（纖維、果膠、木糖等）、蛋白（微管蛋白、伸展蛋白、成束蛋白等）、激素（乙烯、赤霉素和煙酰胺）、細(xì)胞色素、氧化還原酶、過(guò)氧化物酶和幾丁

4、質(zhì)酶等代謝相關(guān)基因。
　　3、選取從功能上與植株生長(zhǎng)和細(xì)胞壁合成相關(guān)的5個(gè)顯著下調(diào)的基因作為候選基因，包括木糖苷酶(Glycometabolism)、果膠酯酶(Pectinesterase)、乙烯響應(yīng)元件結(jié)合因子(ERF-like protein)、煙酰胺合酶基因NAS(Nicotianamine synthase 1)以及聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonase），間隔31天分3個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集材料，以18sRNA為內(nèi)參采