畜禽用蜂膠口服液的研制.pdf

1、蜂膠(propolis)是蜜蜂從植物芽孢和樹(shù)干處采集的樹(shù)脂，混入蜜蜂上顎腺分泌物和蜂蠟等形成的一種具有芳香味的粘性膠狀固形物。研究證實(shí)，蜂膠具有抗細(xì)菌、抗病毒、抗真菌、抗腫瘤、抗氧化、抗?jié)?、抗疲勞、抗過(guò)敏、調(diào)節(jié)免疫、保肝護(hù)肝、促進(jìn)組織再生等廣泛的藥理作用，醫(yī)學(xué)臨床及保健品市場(chǎng)已得到廣泛使用，而獸醫(yī)臨床上蜂膠相關(guān)研究報(bào)道及應(yīng)用較少。
　　 本文研究了蜂膠活性成分的最佳提取精制條件，制備出畜禽用蜂膠口服液，完成了質(zhì)量控制及穩(wěn)定性等

2、藥學(xué)研究。具體內(nèi)容如下:
　　 1蜂膠口服液制備工藝的研究
　　 蜂膠活性成分的提取與精制:醇提水沉法。質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)為蜂膠中白楊素、高良姜素、總黃酮的提取率均不小于80％，正交優(yōu)化確定最佳醇提工藝和水沉條件。完全流程為:取已粉碎過(guò)20目的蜂膠粉末100 g，加入80％乙醇使蜂膠含量達(dá)20％(g/mL)，40℃浸提4d，每天至少充分?jǐn)嚢?次，冷藏（0～4℃）24 h，濾過(guò)取上清液;冷藏24 h，濾過(guò)取上清液;以氨水調(diào)pH值

3、至8.0～8.5，加入已溶解亞硫酸鈉(3 g)、乙二胺四乙酸二鈉(0.3 g)的純化水，攪拌，至乙醇含量為50‰冷藏(0～4℃)24h，濾過(guò)取上清液減壓濃縮至稠膏狀，備用。
　　 蜂膠口服液制備工藝:取以上稠膏，加900 mL溶媒(乙醇∶丙三醇∶穩(wěn)定劑=7.8∶2∶0.2)，以氨水調(diào)pH值至7.5～8.5，濾過(guò)，加溶媒至1000 mL，灌封，即得。所制10％（每100mL含生藥10 g）蜂膠提取物口服液，活性成分含量控制標(biāo)準(zhǔn)為:

4、白楊素不得少于1.6 mg/mL，高良姜素不得少于0.8 mg/mL，總黃酮以蘆丁計(jì)不得少于12mg/mL;溶媒系統(tǒng)為乙醇∶丙三醇∶穩(wěn)定劑=7.8∶2∶0.2。
　　 蜂膠口服液中試生產(chǎn):三批次各投蜂膠原料10kg，按以上工藝在GMP車間中試生產(chǎn)。結(jié)果成品率在95％以上，顯示該工藝工業(yè)化生產(chǎn)可行，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
　　 2蜂膠口服液質(zhì)量控制方法的研究
　　 《中國(guó)藥典》2010年版一部以蜂膠中白楊素和高良姜素含量評(píng)

5、價(jià)其質(zhì)量。中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)——蜂膠正文中，則以蜂膠中總黃酮含量評(píng)價(jià)其質(zhì)量。綜合考慮以上兩個(gè)蜂膠國(guó)家質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)蜂膠口服液的質(zhì)量控制方法進(jìn)行了研究。
　　 蜂膠口服液中白楊素及高良姜素含量質(zhì)量控制:薄層色譜法定性及高效液相色譜法定量研究。薄層色譜條件:采用硅膠G薄層板，展開(kāi)劑為三氯甲烷-甲醇-丁酮(9.4∶0.3∶0.3)，顯色劑為三氯化鋁試液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置

6、上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);斑點(diǎn)清晰，分離較好，重復(fù)性及專屬性均良好。高效液相色譜條件:色譜柱為ZORBAX-SB-C18柱(5μm，25 cm×4.6 mm)，流動(dòng)相為0.15％磷酸溶液-甲醇(36∶64)，流速為1.0 mL·min-1，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為268 nm，進(jìn)樣量為20μL，柱溫為25℃。白楊素檢測(cè)濃度線性范圍為1～24μg·mE-1，線性方程為:Ar=129998C-19260(R2=0.9997)，平均回收率為101.49

7、％(RSD=0.92％，n=6)。高良姜素檢測(cè)濃度線性范圍為1～24μg·mL-1，線性方程為:Ar=73356C-21955（R2=0.9995），平均回收率為100.76％(RSD=1.62％，n=6)。本法操作簡(jiǎn)便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性較好，可用于測(cè)定蜂膠口服液中白楊素及高良姜素的含量。
　　 蜂膠口服液中總黃酮含量（以蘆丁計(jì)）質(zhì)量控制:紫外分光光度法定量研究。檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm，蘆丁濃度線性范圍為5～25μg·m

8、L-1，線性方程為:A=0.0319C-0.0191(R2=0.9995)，平均回收率為100.31％(RSD=0.58％，n=6)。本法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測(cè)定蜂膠口服液中總黃酮的含量。
　　 3蜂膠口服液的穩(wěn)定性初步研究
　　 按《中國(guó)獸藥典》2010年版一部要求，考察蜂膠口服液的穩(wěn)定性。光照影響因素試驗(yàn)，結(jié)果顯示:與0d相比，光照5、10d口服液性狀無(wú)變化;5、10d時(shí)pH分別下降0.11、0.12;白楊素和