Corticosterone in Ovo Programs Growth,Behavior and Ovary Functions in the Chicken.pdf

1、在本文的研究中，我們首先闡明了慢生長(zhǎng)型及快生長(zhǎng)型雞蛋的表型、胚胎的生長(zhǎng)速率及個(gè)體發(fā)育的差異，比較了蛋內(nèi)皮質(zhì)酮水平，糖皮質(zhì)激素代謝酶包括11β-HSD1，11β-HSD2和20-HSD在雞胚組織中的分布，探討了胚胎肝臟糖皮質(zhì)激素代謝酶的表達(dá)與生長(zhǎng)速度的關(guān)系。其次，我們?cè)诜趸陔u蛋內(nèi)注射皮質(zhì)酮研究胚胎發(fā)育中期皮質(zhì)酮暴露對(duì)出殼后生長(zhǎng)和行為的影響，探討下丘腦中相關(guān)基因表達(dá)的變化，并進(jìn)行了相關(guān)的表觀遺傳分析。最后，我們將皮質(zhì)酮注射到入孵前種蛋內(nèi)，

2、研究早期胚胎皮質(zhì)酮暴露對(duì)生長(zhǎng)性能、行為表現(xiàn)，緊張不動(dòng)性(TI)表型，以及繁殖行為及卵巢功能的影響。同時(shí)，我們也檢測(cè)了下丘腦及卵巢卵泡中下丘腦-垂體-性腺軸相關(guān)基因的表達(dá)，以分析皮質(zhì)酮程序化影響的作用機(jī)制。
　　1、慢生長(zhǎng)型與快生長(zhǎng)型雞蛋內(nèi)皮質(zhì)酮含量及雞胚肝臟皮質(zhì)酮代謝相關(guān)酶表達(dá)的差異
　　糖皮質(zhì)激素(GCs)對(duì)胚胎發(fā)育是極其重要的，它們的生物活性受細(xì)胞內(nèi)代謝酶包括11β-羥類固醇脫氫酶(11β-HSDs)和20-羥類固醇脫氫

3、酶(20-HSD)的調(diào)節(jié)。本章研究了慢生長(zhǎng)型及快生長(zhǎng)型種蛋皮質(zhì)酮含量，以及糖皮質(zhì)激素代謝酶的組織分布及基因表達(dá)的品種差異。結(jié)果表明:在所有生長(zhǎng)階段，快生長(zhǎng)型雞蛋重及胚胎重量都顯著性高于慢生長(zhǎng)型?？焐L(zhǎng)型蛋黃及蛋清中所含的皮質(zhì)酮水平都顯著性高于慢生長(zhǎng)型(P＜0.05)。11β-HSD1，11β-HSD2及20-HSD基因幾乎在所有組織中都檢測(cè)到表達(dá)。11β-HSD1，11β-HSD2基因分別在肝臟，腎臟及小腸中表達(dá)量相對(duì)較高。在肝臟中，1

4、1β-HSD1，11β-HSD2在孵化期基因表達(dá)顯著性上調(diào)，而20-HSD2表現(xiàn)不同，在出殼第一天(D1)肝臟中20-HSD2基因表達(dá)顯著下降。肝臟中11β-HSD1和11β-HSD2基因表達(dá)在快生長(zhǎng)型雞胚胎所有發(fā)育期中都顯著高于慢生長(zhǎng)型雞胚。此外，快生長(zhǎng)型雞胚胎肝臟11β-HSD1蛋白表達(dá)水平在胚胎發(fā)育第14天(E14)，11β-HSD2蛋白表達(dá)水平在E14和D1，以及20-HSD在E14都顯著高于同日齡的慢生長(zhǎng)型雞胚。我們的結(jié)果首次

5、闡明快生長(zhǎng)型與慢生長(zhǎng)型雞蛋內(nèi)皮質(zhì)酮水平以及胚胎肝臟中糖皮質(zhì)激素代謝酶表達(dá)水平是有區(qū)別的，這些差異可能在一定程度上與雞生長(zhǎng)發(fā)育和代謝類型的品種差異有關(guān)。
　　2、胚胎期皮質(zhì)酮暴露通過改變中樞5-羥色胺能系統(tǒng)影響雞的爭(zhēng)斗行為
　　本章通過在孵化到中期的蛋內(nèi)注射皮質(zhì)酮來研究胚胎發(fā)育中期皮質(zhì)酮暴露對(duì)新生兒表型及爭(zhēng)斗行為的影響，并試圖從中樞5羥色胺能系統(tǒng)核HPA軸相關(guān)基因表達(dá)來研究相關(guān)的機(jī)制。在孵育11天的受精蛋內(nèi)注射等體積生理鹽水（

6、對(duì)照組），低劑量皮質(zhì)酮(0.2μg)及高劑量皮質(zhì)酮(1μg)，研究雞出殼后28天的行為變化，檢測(cè)下丘腦中應(yīng)激及爭(zhēng)斗行為相關(guān)基因表達(dá)及啟動(dòng)子甲基化來解釋某些潛在的機(jī)制。蛋內(nèi)注射高劑量的皮質(zhì)酮顯著地抑制了21到70日齡的生長(zhǎng)速度。體重受到抑制可能與爭(zhēng)斗行為增多有關(guān)。注射高劑量皮質(zhì)酮顯著地升高了血漿中皮質(zhì)酮含量，同時(shí)導(dǎo)致下丘腦中精氨酸加壓素(AVT)及促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)基因表達(dá)下調(diào)。而且，皮質(zhì)酮注射組雞下丘腦內(nèi)GR蛋白水平也顯

7、著下降，盡管在mRNA水平上沒表現(xiàn)顯著差異。皮質(zhì)酮暴露導(dǎo)致外周血血小板攝取5-羥色胺(5-HT)顯著升高，全血中5-羥色胺濃度下降，下丘腦中5-HTR1A基因表達(dá)水平升高，5-HTR1B沒有變化，色氨酸羥化酶1表達(dá)下降，單胺氧化酶-A上調(diào)而和單胺氧化酶-B沒有變化。此外，高劑量皮質(zhì)酮處理顯著地增加了下丘腦中GR，CRH基因啟動(dòng)子DNA甲基化水平。結(jié)果提示胚胎期皮質(zhì)酮暴露通過改變下丘腦5-HT和HPA系統(tǒng)相關(guān)基因的表達(dá)影響出雛后生長(zhǎng)和行為

8、，下丘腦GR，CRH基因啟動(dòng)子DNA甲基化水平的改變提示表遺傳機(jī)制的參與。
　　3、入孵前蛋內(nèi)注射皮質(zhì)酮通過下調(diào)HPG軸相關(guān)基因表達(dá)程序化影響成年母雞的卵巢功能
　　眾所周知，在許多物種中激活HPA軸會(huì)抑制下丘腦-垂體-性腺軸。在我們的研究中，我們?cè)谌敕跚暗氖芫皟?nèi)注射等體積生理鹽水（對(duì)照組），低劑量皮質(zhì)酮(0.2μg)及高劑量皮質(zhì)酮（1μg），出殼后25周齡進(jìn)行緊張性不動(dòng)試驗(yàn)，并觀察母雞產(chǎn)蛋性能的變化。蛋內(nèi)注射皮質(zhì)酮顯著降

9、低了生長(zhǎng)速度，增加了爭(zhēng)斗行為和緊張性不動(dòng)持續(xù)時(shí)間。血漿中皮質(zhì)酮水平在高劑量組增加，并伴隨蛋黃中皮質(zhì)酮沉積也升高。高劑量皮質(zhì)酮注射組產(chǎn)蛋率減少，雞蛋蛋重，蛋殼重，蛋白及蛋黃重，卵巢重及輸卵管的重量也下降。相對(duì)于對(duì)照組，皮質(zhì)酮暴露組下丘腦中GnRH基因表達(dá)顯著下調(diào)，而GnIH基因表達(dá)卻顯著地上調(diào)了，且呈劑量依賴性。另一方面，蛋內(nèi)注射皮質(zhì)酮使得下丘腦中11β-HSD1基因表達(dá)水平顯著升高，11β-HSD2基因表達(dá)下降，20-HSD基因表達(dá)沒有