香蜂花離體培養(yǎng)及其揮發(fā)油成分的GC-MS分析.pdf

1、本試驗(yàn)以香蜂花(Melissa officinalis)帶芽莖段為材料，比較系統(tǒng)地進(jìn)行香蜂花莖段培養(yǎng)與快繁技術(shù)研究，摸索香蜂花試管苗工廠化生產(chǎn)模式的基本參數(shù)，并系統(tǒng)地研究了香蜂花試管苗玻璃化的影響因素；同時(shí)，以香蜂花種子、葉片和莖段為材料，進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)與植株再生研究。最后，利用GC-MS技術(shù)分析香蜂花試管苗和盆栽實(shí)生苗的揮發(fā)油成分差異，以期為香蜂花離體培養(yǎng)建立有效途徑，為香蜂花大規(guī)模工廠化試管育苗及種質(zhì)資源保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。主要研究

2、結(jié)果如下： 1.香蜂花帶芽莖段的培養(yǎng)。以香蜂花帶芽莖段為材料，研究了香蜂花帶芽莖段培養(yǎng)和離體繁殖。結(jié)果表明：3月取香蜂花帶芽莖段經(jīng)過75％乙醇30 s+0.1％HgCl2 5 min處理為最佳取材時(shí)期和消毒方式；帶芽莖段在MS+0.5 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA培養(yǎng)基中不定芽誘導(dǎo)率達(dá)到100.0％；不定芽適宜增殖的培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+0.1mg/L IBA，增殖倍數(shù)達(dá)

3、到4.6；最佳的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.5 mg/L IBA，生根率達(dá)到100.0％；適宜的移栽基質(zhì)為1:1:1珍珠巖：蛭石：河沙，成活率為93.3％。 2.香蜂花試管苗工廠化生產(chǎn)模式的確定。香蜂花工廠化試管育苗主要技術(shù)參數(shù)：繼代增殖系數(shù)4.5，每25 d繼代1次，一年可增殖繼代12代，生根率100.0％，移栽成活率93.3％。以此為參數(shù)，離體培養(yǎng)時(shí)污染率控制在5％以下，玻璃化苗控制在5％以下，理論上香蜂花1個(gè)芽1年繼代12

4、次既可增殖403.8萬株，可以達(dá)到快繁的要求。 3.香蜂花試管苗玻璃化現(xiàn)象的研究。以香蜂花正常試管苗的帶芽莖段為材料，針對(duì)6-BA濃度、溫度、培養(yǎng)器皿、繼代時(shí)間、蔗糖濃度和瓊脂濃度等影響因素，研究了香蜂花帶芽莖段培養(yǎng)過程中控制玻璃化現(xiàn)象的措施。結(jié)果表明：香蜂花正常試管苗的適宜培養(yǎng)的6-BA濃度為0.5-2.0 mg/L，30 g/L蔗糖和7g/L瓊脂的培養(yǎng)基中玻璃化率為最低。試管苗培養(yǎng)于玻璃瓶+塑料膜的培養(yǎng)容器內(nèi)，置于25℃培養(yǎng)

5、溫度，30 d繼代培養(yǎng)一次時(shí)可有效地控制玻璃化發(fā)生。 4.香蜂花愈傷組織的培養(yǎng)。以香蜂花種子、葉片、葉柄、莖段為材料，研究了香蜂花愈傷組織的培養(yǎng)。結(jié)果表明：香蜂花種子最佳的消毒方式為75％乙醇30 s+0.1％HgCl2 5 min，于MS培養(yǎng)基中萌發(fā)率達(dá)到85.5％；愈傷組織最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L2,4-D，誘導(dǎo)率達(dá)97.1％：香蜂花不同取材部位(葉片，葉柄，莖段)的愈傷組織誘導(dǎo)率差

6、異不顯著，不同取材部位均可達(dá)到極高的愈傷誘導(dǎo)率；愈傷組織最佳增殖的培養(yǎng)基為MS+2mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA+0.2 mg/L2,4-D，增殖率達(dá)到76.7％；在培養(yǎng)基MS+1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L2,4-D上部分愈傷組織可以分化芽苗。 5.香蜂花試管苗揮發(fā)油成分的氣相色譜.質(zhì)譜(GC-MS)分析。以香蜂花試管苗為材料，利用GC-MS技術(shù)共分離出19種物質(zhì)，主要成分