美洛昔康對犬軟骨細(xì)胞影響的試驗研究.pdf

1、骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis）（又稱骨關(guān)節(jié)病）是老年人中最常見的關(guān)節(jié)疾病。骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生最終來源于軟骨細(xì)胞的變化，因此研究軟骨疾病的基礎(chǔ)是對軟骨細(xì)胞的研究。美洛昔康作為一種新型的非甾體抗炎藥，在獸醫(yī)臨床上應(yīng)用廣泛，很少報道有關(guān)于其對正常犬軟骨細(xì)胞的研究，本研究主要是探索美洛昔康對犬正常軟骨細(xì)胞的生理影響，期望對臨床上安全使用提供一定的幫助。
　　試驗內(nèi)容主要包括原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定，MTT、流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR。首

2、先通過從犬膝關(guān)節(jié)取材，采用不完全消化法從組織中分離獲取軟骨細(xì)胞，進(jìn)行軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)，并通過甲苯胺藍(lán)染色、細(xì)胞免疫化學(xué)鑒定體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞仍保持軟骨細(xì)胞特性。根據(jù)美洛昔康的血漿有效濃度，選取5μmol/L，10μmol/L，20μmol/L三個試驗劑量，并設(shè)計對照組0μmol/L，刺激軟骨細(xì)胞24h和48h。用MTT比色法檢測不同劑量美洛昔康對犬正常軟骨細(xì)胞的增殖影響，并用流式細(xì)胞術(shù)檢測軟骨細(xì)胞的凋亡率和周期，RT-PCR檢測相關(guān)細(xì)胞

3、凋亡因子Bax、Bcl-2、p53mRNA的表達(dá)，期望從基因水平探究不同劑量美洛昔康對犬軟骨細(xì)胞生理活動的影響。
　　試驗結(jié)果表明：（1）MTT：0μmol/L，5μmol/L，10μmol/L，20μmol/L劑量美洛昔康分別刺激犬正常軟骨細(xì)胞24h和48h，對軟骨細(xì)胞的增殖無顯著差異影響。比較同劑量在24h和48h的刺激效果，也并無顯著差異，證明5μmol/L，10μmol/L，20μmol/L劑量美洛昔康對犬正常軟骨細(xì)胞的增

4、殖基本無影響。
　?。?）流式檢測細(xì)胞凋亡率表明不同美洛昔康對犬正常軟骨細(xì)胞的凋亡并無顯著性影響，檢測周期表明，隨著刺激時間的增長，細(xì)胞G1、G2、S期都發(fā)生顯著變化，G1期細(xì)胞比例顯著減小，G2期、S期細(xì)胞比例增大具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　（3）RT-PCR檢測相關(guān)細(xì)胞凋亡因子Bax、Bcl-2、p53mRNA的表達(dá)，5μmol/L和10μmol/L劑量組Bcl-2/Bax比率上調(diào)，差異顯著具有統(tǒng)計學(xué)意義，p53基因表達(dá)與對照