太湖鵝膽固醇7α-羥化酶基因啟動(dòng)子的克隆及p53結(jié)合元件的初步鑒定.pdf

1、膽固醇7α-羥化酶（Cholestrol7α-Hydroxylase，CYP7A1）又稱膽固醇7α-單氧酶或細(xì)胞色素P4507A1酶，屬肝臟特異性微粒體細(xì)胞色素P450酶系，該酶位于肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，作用是催化膽固醇生成7α-固醇，后者經(jīng)過(guò)固醇核還原、羥化、側(cè)鏈斷裂和加輔酶A等反應(yīng)生成初級(jí)膽汁酸，同時(shí)CYP7A1也是此途徑的限速酶。大量研究證明，膽固醇-膽汁酸平衡對(duì)機(jī)體健康具有重要作用，血液膽固醇水平過(guò)高會(huì)引起高膽固醇血癥、動(dòng)脈硬化、膽

2、結(jié)石等疾病，而膽汁酸水平過(guò)高則可能會(huì)導(dǎo)致膽囊癌、結(jié)直腸癌的發(fā)生。CYP7A1基因自身多態(tài)性、多種核受體、細(xì)胞因子、激素共同組成了CYP7A1基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄激活/抑制級(jí)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，維持體內(nèi)膽汁酸-膽固醇平衡及脂質(zhì)動(dòng)態(tài)平衡。目前該基因在畜禽領(lǐng)域的研究還不夠深入，尤其是在轉(zhuǎn)錄水平的研究較少。有研究表明，CYP7A1基因表達(dá)和P53蛋白在肝臟細(xì)胞增殖、脂肪變性及細(xì)胞凋亡等過(guò)程中可能存在某種協(xié)同關(guān)系。本研究以鵝為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，成功地克隆了CYP7A1基因

3、啟動(dòng)子區(qū)序列，并初步探索了該序列上P53蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，以及P53蛋白對(duì)CYP7A1基因的調(diào)控作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)利用基因組步移技術(shù)，首次從鵝基因組DNA克隆到CYP7A1基因5'調(diào)控區(qū)序列，長(zhǎng)為2004bp。利用在線軟件對(duì)所得序列結(jié)果進(jìn)行了序列分析，預(yù)測(cè)了啟動(dòng)子功能區(qū)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控結(jié)合位點(diǎn)，其中P53的結(jié)合位點(diǎn)有6處。
　　 本研究根據(jù)CYP7A1基因5'調(diào)控區(qū)序列成功克隆了一組缺失突變體，將缺失突變體構(gòu)建重組雙熒光素酶報(bào)