羅非魚(yú)眼透明質(zhì)酸的提取、降解及其抗氧化性研究.pdf

1、透明質(zhì)酸(HA)是一種良好的生物活性物質(zhì)，不同分子量大小的HA在生物體內(nèi)發(fā)揮著各自的功能，對(duì)機(jī)體的正常生理活動(dòng)起著重要作用。
　　羅非魚(yú)是我國(guó)養(yǎng)殖規(guī)模最大的魚(yú)種之一，其加工制品大部分為凍羅非魚(yú)片，而加工過(guò)程中產(chǎn)生的下腳料多數(shù)未得到充分的應(yīng)用。羅非魚(yú)眼透明質(zhì)酸含量豐富，可以作為生產(chǎn)HA的原料，因此，為提高羅非魚(yú)加工下腳料的高值化利用，本論文對(duì)羅非魚(yú)眼HA進(jìn)行了以下方面的研究:
　　一、羅非魚(yú)眼透明質(zhì)酸的提取純化及結(jié)構(gòu)鑒定

2、>　　本研究通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)、正交實(shí)驗(yàn)考察了酶種類(lèi)、酶用量、酶水解時(shí)間、超聲波處理時(shí)間和超聲波功率對(duì)HA提取的影響，優(yōu)化了透明質(zhì)酸的提取工藝，其最佳工藝條件為:超聲波功率200 W、超聲處理時(shí)間15 min、復(fù)合酶（胰蛋白酶和復(fù)合蛋白酶的酶活力比1∶1的混合物）、酶作用時(shí)間3h、酶解溫度40℃、酶解pH9.0、酶用量6000 U·g-1，利用該工藝條件提取透明質(zhì)酸的最終得率為11.44％。
　　利用CTAB（十六烷基三甲基溴化銨）絡(luò)

3、合法進(jìn)行粗純化，除去大部分的蛋白質(zhì)及不與CTAB結(jié)合的雜質(zhì);然后采用HiTrapTM DEAE FF離子交換柱進(jìn)行再純化，得到的產(chǎn)品純度為97.47％，紫外圖譜中無(wú)蛋白質(zhì)和核酸的吸收峰;利用粘度法測(cè)量羅非魚(yú)眼HA的相對(duì)分子量，其大小約為100 KDa;紅外光譜圖顯示其吸收峰和標(biāo)準(zhǔn)品基本相同。
　　二、羅非魚(yú)眼透明質(zhì)酸的降解研究
　　本研究以透明質(zhì)酸的分子量及葡萄糖醛酸(GlcA)的含量為參考指標(biāo)比較物理法（微波）、化學(xué)法（過(guò)

4、氧化氫結(jié)合抗壞血酸）和復(fù)合降解法（微波結(jié)合過(guò)氧化氫+抗壞血酸）等方法對(duì)羅非魚(yú)眼透明質(zhì)酸降解的影響，結(jié)果顯示復(fù)合降解法制備的低分子量透明質(zhì)酸(LMWHA)分子量低且其對(duì)糖環(huán)的破壞較小。
　　通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了復(fù)合法的工藝條件，如下:pH4、溫度60℃、H2O2∶Vc為1∶1、過(guò)氧化氫的添加量2～4 mmol·L-1、時(shí)間30 min，利用該工藝可制備相對(duì)分子量小于2 KDa的LMWHA，其紅外光譜與降解前的樣品類(lèi)似，表明該降解工藝

5、對(duì)透明質(zhì)酸的基本結(jié)構(gòu)未造成破壞，而紫外光譜260 nm處出現(xiàn)微弱的吸收，該吸收可能緣于降解時(shí)主鏈斷裂或者脫氫反應(yīng)產(chǎn)生的不飽和結(jié)構(gòu)。
　　三、低分子量透明質(zhì)酸的制備及其抗氧化性研究
　　本研究采用微波結(jié)合過(guò)氧化氫+抗壞血酸法降解羅非魚(yú)眼透明質(zhì)酸，通過(guò)改變降解條件制備相對(duì)分子量分別為小于5 KDa、5～10 KDa、10～30 KDa、30～60KDa的LMWHA。
　　研究比較了不同分子量LMWHA對(duì)·OH、DPPH自由