PTHLH在雞卵泡發(fā)育中的功能、表達(dá)調(diào)控及其與產(chǎn)蛋性能的關(guān)系.pdf

1、甲狀旁腺激素樣激素（PTHLH）最初被認(rèn)為是引起惡性腫瘤伴發(fā)的體液高鈣血癥的主要原因，能通過自分泌、旁分泌、細(xì)胞內(nèi)分泌等方式起作用，生物學(xué)功能涉及鈣轉(zhuǎn)運(yùn)、骨形成、平滑肌收縮、細(xì)胞增殖分化等多個方面。PTHLH與PTH共用一個G蛋白偶聯(lián)受體PTH1R，該受體在進(jìn)化過程中高度保守。實驗室前期對雞SY卵泡進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序，發(fā)現(xiàn)雞FSHR的mRNA表達(dá)水平高的SY卵泡中，PTHLH基因的mRNA水平也升高，推測其可能參與卵泡選擇。本實驗研究了P

2、THLH及其受體PTH1R在雞卵巢卵泡中的表達(dá)調(diào)控，鑒定了PTHLH啟動子區(qū)的多態(tài)性，并探索了多態(tài)性與雞產(chǎn)蛋性能之間的關(guān)系。
　　我們首先通過5′-及3′-RACE確定了PTHLH在雞上主要表達(dá)NCBI上第一轉(zhuǎn)錄本。PTHLH與PTH1R mRNA表達(dá)一致，在等級前卵泡中表達(dá)量逐漸上升，在SY中達(dá)到最高，大黃卵泡（LY）中次之，在等級卵泡中表達(dá)量顯著下降；PTHLH主要在等級前卵泡的膜細(xì)胞和等級卵泡的顆粒細(xì)胞中表達(dá)，而PTH1R在

3、卵泡發(fā)育各時期均在膜細(xì)胞中表達(dá)，他們蛋白水平的表達(dá)在各級卵泡及不同時期卵泡的顆粒細(xì)胞、膜細(xì)胞中的表達(dá)無顯著差異。PTHLH能刺激細(xì)胞增殖，并能促進(jìn)未成熟卵泡中顆粒細(xì)胞的分化，通過刺激類固醇激素合成相關(guān)酶如StAR、CYP11A1的產(chǎn)生，促進(jìn)類固醇激素的產(chǎn)生。用FSH處理原代雞卵泡顆粒細(xì)胞、膜細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)PTHLH的mRNA在等級前卵泡的膜細(xì)胞及等級卵泡的顆粒細(xì)胞中表達(dá)量升高。我們進(jìn)一步檢測了PTHLH的啟動子活性，在確定的兩個關(guān)鍵調(diào)控區(qū)各

4、檢測到一個SNP：rs72520524（C＞T）和rs72518862（A＞G），兩個SNP完全連鎖不平衡，雜合基因型AG和CT以及雙倍型AC/GT對應(yīng)雞更早的開產(chǎn)日齡及更多的32周產(chǎn)蛋數(shù)。每個SNP均位于一個轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點，兩個轉(zhuǎn)錄因子共同作用，受FSH調(diào)控，作用于PTHLH轉(zhuǎn)錄。EMSA實驗確定C＞T(rs72520524)包含于AP-1結(jié)合位點，但A＞G(rs72518862)不包含于NF-κB結(jié)合位點中。
　　綜上所述