“能飼一號”甜高粱BIBAC文庫的構建與分析.pdf

1、雙元細菌人工染色體(binarybacterialartificialchromosome，BIBAC)是一類可以在大腸桿菌與農桿菌中穿梭的載體，它除了可以構建大片段DNA文庫，還可以將大片段DNA直接轉入植物。它是基因圖位克隆、功能分析等的重要工具，目前該項技術已經(jīng)被廣泛的運用。
　　 “能飼一號”甜高粱含有諸多的優(yōu)良性狀，構建“能飼一號”甜高粱BIBAC文庫有助于篩選優(yōu)良基因并將其轉化入其它植物體中，突破物種間的隔離，從而對

2、植物性狀改良提供幫助。水稻是最重要的經(jīng)濟作物，選擇水稻進行遺傳轉化具有深遠的意義。
　　 本課題圍繞水稻遺傳轉化展開準備工作，以“能飼一號”甜高粱嫩葉為材料，構建了BIBAC文庫，并對文庫進行了BIBAC末端測序以及BIBAC克隆在大腸桿菌、農桿菌中的穩(wěn)定性檢測。
　　 “能飼一號”甜高粱BIBAC文庫總克隆數(shù)為51840，空載率為2.29％，平均插入片段大小為110.7kb，線粒體、葉綠體污染率分別為0.1％和2.2％

3、，文庫的覆蓋度為7.65×(高粱全基因組大小為750Mb)。
　　 將144個克隆進行BIBAC末端測序，成功獲得252個末端序列，末端測序成功率達到87.5％，平均長度為579.0bp，得到總長為145913bp的末端序列，占高粱全基因組大小的0.02‰。經(jīng)Repeat-masker處理后，發(fā)現(xiàn)反轉錄因子(Retroelements)在重復序列中所占的比例最高，占總長的46.59％。參考高全基因組序列，對BIBAC末端序列進行