生長分化因子-9對牛卵丘細(xì)胞影響的研究.pdf

1、本論文研究了重組GDF-9對牛卵丘細(xì)胞增殖及擴(kuò)展相關(guān)基因表達(dá)的影響。研究結(jié)果分如下4個部分:
　　1.通過RT-PCR檢測體外培養(yǎng)不同成熟時間的牛卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體中GDF-9的表達(dá)情況，同時觀察卵丘擴(kuò)展情況。結(jié)果表明在不同的成熟培養(yǎng)時間，GDF-9基因在牛卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體中均有表達(dá)，且在體外成熟培養(yǎng)12小時表達(dá)量成峰值，與卵丘細(xì)胞開始擴(kuò)展的時間一致。
　　2.將卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體中的卵母細(xì)胞進(jìn)行去除處理，同時加入外源10

2、0ng/mlGDF-9以及10ug FSH，觀察外源GDF-9和內(nèi)源的GDF-9對卵母細(xì)胞的卵丘細(xì)胞復(fù)合體在體外培養(yǎng)中擴(kuò)展的影響。結(jié)果表明不論外源GDF-9和內(nèi)源的GDF-9在卵丘細(xì)胞擴(kuò)展中都起著重要的作用，而且FSH對卵丘細(xì)胞的作用也需要GDF-9的協(xié)同。
　　3.在牛卵丘細(xì)胞體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，研究外源GDF-9和FSH對其生長的影響。結(jié)果表明，不論FSH存在與否，GDF-9可以促進(jìn)牛卵丘細(xì)胞增殖，這種促進(jìn)作用隨著濃度的增加而增

3、強(qiáng)。而且在相同GDF-9濃度下，F(xiàn)SH顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖，表明GDF-9與FSH在一定程度上對卵丘細(xì)胞的增殖具有協(xié)同作用。采用實時熒光定量PCR技術(shù)研究不同濃度下外源重組GDF-9對牛卵丘細(xì)胞擴(kuò)展相關(guān)基因(PTX3、HAS2、PTGS2)表達(dá)的影響，試驗結(jié)果表明:擴(kuò)展相關(guān)基醫(yī)表達(dá)對GDF-9濃度具有梯度依賴性，隨著GDF-9濃度的增大，擴(kuò)展相關(guān)基因表達(dá)也隨著增大，表明GDF-9在卵丘細(xì)胞擴(kuò)展中起到一定的作用。
　　4.構(gòu)建牛GDF-

4、9基因真核表達(dá)質(zhì)粒，在牛卵丘細(xì)胞中過表達(dá)。利用western-blot檢測GDF-9在卵丘細(xì)胞中過表達(dá)情況，同時通過實時熒光定量PCR技術(shù)檢測擴(kuò)展相關(guān)基因表達(dá)的情況。(1)通過western-blot對牛GDF-9過表達(dá)檢測結(jié)果表明，檢測有單一條帶，說明GDF-9真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功。(2)與對照組相比，過表達(dá)GDF-9的牛卵丘細(xì)胞中擴(kuò)展相關(guān)基因的表達(dá)明顯升高。
　　本試驗通過對GDF-9在卵丘細(xì)胞體外增殖培養(yǎng)中的作用研究，表明G