血管內(nèi)皮生長因子對誘導(dǎo)多能干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的：觀察血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)對小鼠誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(miPSc)向心肌細(xì)胞分化的影響。
　　方法：在白血病抑制因子(LIF)和成纖維細(xì)胞存在的條件下培養(yǎng)小鼠iPSc，從小鼠iPSc的鏡下形態(tài)特征，干細(xì)胞基因Oct-4的表達(dá)及iPSc的堿性磷酸酶染色方面鑒定iPSc。并采用懸滴培養(yǎng)法啟動iPSc分化，分別以10ng/ml、20ng/ml、50 ng/ml的VEGF作為誘導(dǎo)劑對小鼠iPSc誘導(dǎo)分化，以自然分化作為陰性對照組，以

2、加入1％二甲亞砜(DMSO)誘導(dǎo)劑作為陽性對照組。每天在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，記錄各組跳動的擬胚體(EBs)出現(xiàn)的具體時間及每天跳動的擬胚體的數(shù)目，進(jìn)一步計算心肌細(xì)胞分化率。PT-PCR檢測分化過程中心肌發(fā)育基因α-MHC和β-MHC mRNA的表達(dá)，細(xì)胞免疫熒光檢測iPSc分化細(xì)胞cTnT的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.在LIF和成纖維細(xì)胞存在的條件下，iPSc呈集落樣或巢狀生長且不斷增殖；熒光顯微鏡下小鼠iPSc呈綠色熒光(O

3、ct-4啟動)，堿性磷酸酶染色提示iPSc細(xì)胞團(tuán)著紫黑色。
　　2.各分化組均可在光鏡下見自發(fā)搏動的EBs，與自然分化組相比，三個濃度組的VEGF均可提高iPSc的心肌細(xì)胞分化率(P<0.05)；VEGF濃度為20 ng/ml時，iPS細(xì)胞的心肌細(xì)胞分化率最高，為53.17％±3.63％(P<0.05)，與二甲亞砜組的心肌細(xì)胞分化率(57.07％±3.22％)相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　3.各分化組分化而來的細(xì)胞

4、均表達(dá)調(diào)控心肌發(fā)育的基因α-MHC和β-MHC；VEGF可上調(diào)α-MHC和β-MHC的表達(dá)，VEGF濃度為20ng/ml時，其上調(diào)作用最為明顯(P<0.05)。
　　4.各分化組分化而來的心肌細(xì)胞可自發(fā)搏動，同時表達(dá)心肌特異蛋白cTnT。
　　結(jié)論：1.在LIF和成纖維細(xì)胞的環(huán)境中，小鼠iPSc保持未分化狀態(tài)，去除這兩者后，小鼠iPSc可以通過形成擬胚體開始分化。
　　2.一定濃度的外源性的VEGF可以促進(jìn)誘導(dǎo)多能干細(xì)