北山羊成纖維細胞體外培養(yǎng)體系的建立及特性分析.pdf

1、北山羊為國家一級保護動物，本研究將獲取的北山羊肌肉組織采用組織塊法培養(yǎng)，進行了原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、冷凍與復蘇，建立了北山羊肌肉組織成纖維細胞的體外培養(yǎng)體系，對所培養(yǎng)細胞部分的生物特性進行了分析研究，并對在4種不同的培養(yǎng)基中、5種不同血清濃度梯度下細胞的生長狀態(tài)進行了比較。
　　結果顯示:北山羊肌肉組織成纖維細胞在體外培養(yǎng)的過程中，正常生長，其組織塊在接種5d后，可觀察到有梭形細胞出現(xiàn)，并從組織塊向外周爬出，7d后多數(shù)游離出組織塊并

2、逐漸匯合。在細胞F5、F10、F15代，分別進行了細胞生長動力學的檢測:計算貼壁率、比較細胞凍存前和復蘇后的存活率、繪制生長曲線。生長動力學的測定顯示細胞生長正常，隨著細胞傳代增加細胞增殖速度有所下降，三代的倍增時間分別為F5:35.65h，F(xiàn)10:43.29h，F(xiàn)15:48.40h。在染色體核型分析部分，選取了不同代次的100個中期分裂細胞，其中88％以上均為二倍體細胞，已經大于建系正常二倍體占75-80％的要求，說明即使經過細胞的多

3、次傳代、凍存、復蘇，本實驗所建立的細胞系遺傳特性是穩(wěn)定的，這種培養(yǎng)體系下培養(yǎng)的北山羊成纖維細胞，可以用于生物工程或其他生物學領域的研究。其性染色體表明研究對象為一只雄性北山羊。在MEM Alpha、DMEM/F12、M199、DMEM高糖四種培養(yǎng)基的對比中，MEM Alpha相較其他培養(yǎng)基更適合北山羊肌肉組織成纖維細胞的體外培養(yǎng)。在血清濃度的選擇上，12％的濃度應是最優(yōu)濃度。
　　本實驗成功建立了北山羊肌肉組織成纖維細胞的體外培養(yǎng)