延邊奶山羊耳成纖維細胞培養(yǎng)體系的建立.pdf

1、本試驗對延邊奶山羊耳成纖維細胞體外培養(yǎng)體系進行了研究。試驗以延邊奶山羊為研究對象，采用傳統(tǒng)的組織塊貼壁培養(yǎng)法，成功的培養(yǎng)出了延邊奶山羊耳部皮膚成纖維細胞系。試驗通過觀察組織塊貼壁情況，觀察原代培養(yǎng)細胞和傳代培養(yǎng)細胞的形態(tài)及生長狀況，繪制出延邊奶山羊成纖維細胞生長曲線，以及對細胞進行染色體核研究，目的是確定該品種細胞從第5代開始至13代之間的成纖維細胞，生長狀況快速良好，細胞整齊，核型數(shù)目正常，可以作為體細胞核移植以及轉基因等試驗的核供體

2、。同時也從細胞水平上對延邊奶山羊的這一特有地方品種進行有效的保存和利用。結果表明：
　　1、通過組織塊貼壁培養(yǎng)法，成功培養(yǎng)出了延邊奶山羊成纖維細胞系。
　　2、確定原代培養(yǎng)最適血清濃度為15％，此濃度下原代細胞游離出的時間約為7天。從組織塊貼壁率的試驗中可以證明，點瓶后倒置5～6小時、后加培養(yǎng)液以及組織塊≤1mm3更利于組織塊貼壁生長。
　　3、據(jù)觀察原代成纖維細胞與傳代細胞形態(tài)基本相似，都呈長梭形或細長條形，或不規(guī)則

3、三角形，細胞群體呈旋渦狀或者放射狀排列。經(jīng)本試驗得出延邊奶山羊原代成纖維細胞生長緩慢，大約7～10天左右游離出細胞，細胞平鋪培養(yǎng)瓶底面一層大約需要20天至一個半月的時間，細胞生長較為緩慢，這與其他山羊不同。觀察5代至13代之間的細胞，長勢快，形態(tài)規(guī)則，細胞密集且規(guī)整。
　　4、繪制生長曲線顯示，延邊奶山羊耳部成纖維細胞成“S”型曲線生長，1～4d細胞處于潛伏期，4～7d為指數(shù)生長期，7d以后進入平臺期，細胞生長緩慢，符合細胞體外生