甘藍(lán)型油菜種子高油酸和低亞麻酸等位基因特異標(biāo)記的開發(fā)及分子標(biāo)記輔助選擇.pdf

1、油菜是世界上產(chǎn)油率最高的經(jīng)濟(jì)作物之一。在我國(guó)自產(chǎn)食用植物油中，菜籽油是第一大來源，在我國(guó)市場(chǎng)上有著重要的地位。菜籽油中的脂肪酸組成及比例是影響其食用以及經(jīng)濟(jì)價(jià)值的關(guān)鍵因素，培育高油酸低亞麻酸的品種是當(dāng)前油菜育種工作的重要目標(biāo)之一。本研究在前人研究的基礎(chǔ)上，開發(fā)了控制甘藍(lán)型油菜高油酸、低亞麻酸含量的FAD2和FAD3等位基因特異標(biāo)記，結(jié)合四引物ARMS-PCR技術(shù)建立標(biāo)記輔助選擇程序。此外，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的具有不同拷貝數(shù)目的反義FAD

2、2植株進(jìn)行聚合雜交，獲得了新的高油酸低亞麻酸的油菜資源。主要研究結(jié)果如下:
　　1、開發(fā)了一種簡(jiǎn)單、快速、可用于大規(guī)模群體基因型鑒定的DNA提取方法。與常規(guī)CTAB提取方法作比較，該方法具有速度快，操作步驟簡(jiǎn)單，無毒害、效率高的優(yōu)勢(shì)。
　　2、基于FAD2基因和FAD3基因的序列差異，分別設(shè)計(jì)了四引物等位基因特異引物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，四引物PCR擴(kuò)增結(jié)果條帶清晰明了，檢測(cè)結(jié)果與常規(guī)兩引物PCR擴(kuò)增結(jié)果一致，可用于高油酸、低亞麻

3、酸油菜分子標(biāo)記輔助育種的前景選擇中。
　　3、利用四引物PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，本研究對(duì)“D126×華5”組合的BC4F2及BC5F2世代油酸和亞麻酸位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，并對(duì)BC4F2世代篩選的17株純合高油酸低亞麻酸材料進(jìn)行側(cè)翼標(biāo)記背景的選擇，統(tǒng)計(jì)在目標(biāo)基因附近發(fā)生重組的頻率。
　　4、分別對(duì)組合“D126×華5”的BC3F3、BC3F4及BC4F2各世代各株系進(jìn)行品質(zhì)性狀及農(nóng)藝性狀的綜合考察。結(jié)果顯示，上述三個(gè)世代的品質(zhì)性狀相對(duì)穩(wěn)

4、定，其中油酸含量相比輪回親本提高了約10個(gè)百分點(diǎn)。在已考察的6種農(nóng)藝性狀中，BC3F4世代所有農(nóng)藝性狀都已回復(fù)為輪回親本水平，而BC3F3及BC4F2世代除主花序長(zhǎng)度及每果粒數(shù)外，其他性狀也回復(fù)甚至超過輪回親本。
　　5、對(duì)含有已經(jīng)完全純合的具有不同反義FAD2拷貝數(shù)目的材料進(jìn)行雜交，包括“單拷貝×中11”，“單拷貝×華5”，“單拷貝×單拷貝”以及“單拷貝×3拷貝”4個(gè)組合。通過測(cè)定雙親、F1及F2代油酸的含量，發(fā)現(xiàn)不同反義FAD