MSTN RNAI和FSTN過表達(dá)基因轉(zhuǎn)移體的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、MSTN(肌抑素，myostatin)，也稱生長分化因子8，屬于TGF-β超家族，是骨骼肌生長和發(fā)育的負(fù)調(diào)控因子，會抑制骨骼肌的生長和發(fā)育。卵泡抑素(follistatin，F(xiàn)STN)又稱為FSH抑制蛋白，是單鏈糖蛋白。FSTN蛋白可以與MSTN黏合在一起，阻斷MSTN的抑制功能，從而促進(jìn)肌肉生長。敲除或敲減MSTN或過表達(dá)FSTN可以促進(jìn)肌肉發(fā)育，有效增加肌肉量。本研究首先構(gòu)建和篩選出MSTN的高效RNAi干擾載體;然后在篩選出的最佳

2、干擾載體的上游插入核基質(zhì)結(jié)合序列(MAR)，構(gòu)建成含有MAR的干擾載體。通過mRNA和蛋白水平的驗(yàn)證，證實(shí)MAR干擾載體顯著提高了干擾效率。當(dāng)將含MAR的干擾載體轉(zhuǎn)染到肌肉衛(wèi)星細(xì)胞后，與肌肉發(fā)育相關(guān)的基因在敲減的細(xì)胞中的表達(dá)量顯著提高。最后，將外源FSTN基因?qū)隡AR干擾載體，構(gòu)建成沒有選擇標(biāo)志和載體骨架序列、安全的獨(dú)立基因轉(zhuǎn)移體，即pMAR-U6-shRNA926-CMV-FSTN。該基因轉(zhuǎn)移體可長期穩(wěn)定降低MSTN基因的表達(dá)并增強(qiáng)

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