萊蕪豬高繁特性分子標記的研究.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文萊蕪豬高繁特性分子標記的研究姓名：柳淑芳申請學位級別：碩士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導教師：杜立新;閆艷春2001.5.1! ! 塑董! 莖薹墮壹整塹絲坌王堡望盟塹塑一 摘要傳統(tǒng)的育種技術對豬繁殖性狀有限的遺傳改良，促使科學家們努力去尋找控制豬高繁殖率的主效基因及其標記。通過候選基因法發(fā)現(xiàn)，F(xiàn) S H p 亞基基因及E S R 基因對豬的產(chǎn)仔數(shù)具有顯著的影響，是預測豬產(chǎn)仔數(shù)的一種理想的標記，可為標記輔 ，助選擇提

2、供可靠的方案，給現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟效益。本文以F S H { 3 亞基基因和E S R 基因作為控制豬高繁殖率的候選基因對萊蕪豬高繁特性的分子機制進行了研究。，( 首先，對影響豬繁殖性能的有關基因不同基因型的檢測方法和聚合酶鏈式反應( P C 、R ) 條件、程序進行優(yōu)化，建立了一種一次P C R 反應同時檢測F S H B 亞基基因、E S R 及o b 基因分子遺傳標記的方法，一次可大批量的同時檢測3 個位點的多態(tài)性。通過P

3、C R 反應對中國華北型地方豬種萊蕪豬以及杜里、長白豬卵泡刺激素( F S H ) B 亞基基因結構區(qū)的插入片段進行擴增，進而對擴增出的O ．5 k b 的產(chǎn)物進行克隆和序列測定。結果表明，萊蕪豬、杜里豬和長白豬在己發(fā)表的豬F S H D 亞基基因序列的+ 8 0 9 與+ 8 1 0 堿基之間，分別存在一個長度為2 7 5 b p 、2 7 T o p 和2 7 4 b p 的插入片段。插入片段末端的p o l y ( A ) 結構分

4、別為1 7 、1 9 和1 6 個腺苷酸，‘均顯著短于高產(chǎn)仔數(shù)豬種太湖豬( 2 9 2 b p 和3 2 個腺苷酸) 。根據(jù)插入片段的長度以及內(nèi)部所具有的R N A 聚合酶ⅡI 啟動子、A l uI 限制性內(nèi)切酶識別位點，判斷此片段為A l u 序列。A l u 序列中有功能的內(nèi)部啟動子能夠轉錄相鄰的染色體序列，故該插入片段可能影響F S H l 3 亞基基因或其他基因的表達調(diào)控。不同品種豬A l u 序列的主要差異是末端的p o l

5、y ( A ) 長短不同，推測該插入片段末端的p o l y ( A ) 結構可能會影響豬的產(chǎn)仔數(shù)。采用P C R - R F L P s 的方法，發(fā)現(xiàn)E S R 基因的1 2 1 b p P C R 擴增片段存在P v uI I 酶切多態(tài)性。對E S R 基因1 2 l b pP C R 片段進行克隆測序，結果5 6 b p 的P v uI I 酶切片段與R F L P s 分析獲得的3 ．7 K b 正向序列的起始部分相同，推測5

6、6 b p 片段位于3 ．7 K b的起始部位。如果3 ．7 K b 條帶與產(chǎn)仔數(shù)效應無關，則該位點的P v uI I 多態(tài)性對產(chǎn)仔數(shù)沒有實際意義。且本研究中，E S R 基因在高產(chǎn)仔數(shù)的萊蕪豬中的多態(tài)性分布亦不能證實B 基因為優(yōu)勢基因。通過對F s H p 亞基基因和E S R 基因的基因型與主要繁殖性狀的相關性分析表明：F S H f l 亞基基因為控制豬高產(chǎn)仔數(shù)的主教基因或與主基因緊密連鎖。F S H B 基因對于萊蕪豬群體的第l

7、 胎產(chǎn)仔數(shù)，A A 基因型比B B 基因型母豬總產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)的差異分別為2 ．0 5 ( ，‘0 ．0 1 ) 和2 ．1 ( p ‘O ．0 1 ) 。對于經(jīng)產(chǎn)萊蕪豬，A A 基因型比B B 基因型母豬總產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)的差異分別為1 ．1 2 ( p ‘0 ．0 5 ) 和l ，2 4 ( F 0 ．0 5 ) 。但是該基因對產(chǎn)仔數(shù)的影響存在顯著的品種聞和胎次間差異。由于在E S R 基因1 2 l b p 條帶與產(chǎn)仔數(shù)效應關系