副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)核酸疫苗的研制——極鞭毛基因FlaⅠ的克隆及其在COS-7細(xì)胞中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、核酸疫苗因有諸多優(yōu)點已經(jīng)成為當(dāng)前疫苗研制領(lǐng)域的研究熱點.我們嘗試從副溶血弧菌鞭毛絲基因和鞭毛蛋白基因入手,研制其核酸疫苗,本文報道這一研究的前期結(jié)果.根據(jù)副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)野生型菌株BB22極鞭毛蛋白FlaⅠ基因cDNA序列,通過合理的引物設(shè)計與合成、鏈延伸反應(yīng)、PCR反應(yīng)和其它分子生物學(xué)技術(shù),合成出FlaⅠ基因全長片段,并將其克隆至pMDl8-T載體質(zhì)粒上,序列分析和酶切鑒定顯示基因得到正確的

2、合成和克隆.用ClaⅠ/EcoRⅠ雙酶切質(zhì)粒pMDl8-FlaⅠ,回收目的基因片段,插入到真核細(xì)胞表達載體pIRESneo同樣經(jīng)ClaⅠ/EcoRⅠ切開的窗口中,將FlaⅠ克隆到pIRESneo中,獲得有意義的重組質(zhì)粒pIRESneo-FlaⅠ.以綠色熒光蛋白GFP基因作報告基因,在相同的實驗條件下,用磷酸鈣介導(dǎo)的貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法和DEAE-葡聚糖法方法,使pIRES-GFP和plRES-FlaⅠ平行轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,pIRES-GF

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