酪蛋白調(diào)控序列指導(dǎo)下的人乳鐵蛋白基因在動物乳腺中表達(dá)特性的研究.pdf

1、該研究是利用牛和羊的酪蛋白的基因組調(diào)控序列和人乳鐵蛋白cDNA組成融合基因,應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)制作乳腺特異性表達(dá)人乳鐵蛋白的轉(zhuǎn)基因山羊.從正常婦女乳腺細(xì)胞cDNA庫中,利用高保真Taq酶PCR法擴(kuò)增出我們所需要的人乳鐵蛋白cDNA基因的兩個不同大小的片段(2.18Kb,2.32Kb).經(jīng)克隆和測序,證明DNA序列是正確的,然后以PGEX4T-3為載體進(jìn)行部分片段原核表達(dá),所產(chǎn)生的融合蛋白中與人乳鐵蛋白部分具有相同的抗原性.再用PCR方法從牛

2、基因組DNA中擴(kuò)增出牛α<,sl>-酪蛋白基因的5′調(diào)控區(qū)(2.3Kb)和3′調(diào)控區(qū)(1.5Kb)以PGEM質(zhì)粒為載體拼接成的調(diào)控序列A;然后在調(diào)控序列A的基礎(chǔ)上,在5′端上游又增加了長約為4Kb牛酪蛋白基因的基因組DNA調(diào)控序列,形成調(diào)控序列B.以及構(gòu)建好的山羊β-酪蛋白基因的調(diào)控序列C.得到的三個調(diào)控序列(A、B、C)與人乳鐵蛋白基因cDNA的兩個片段(2.18Kb,2.32Kb)構(gòu)建成六個融合基因構(gòu)件(PCN1,PCN2,261,