低木質(zhì)素轉(zhuǎn)基因挪威云杉的植株再生及功能基因表達(dá)的微陣列檢測(cè).pdf

1、該項(xiàng)目研究的目的就是采用瑞典農(nóng)業(yè)大學(xué)構(gòu)建的反義ccr基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的挪威云杉細(xì)胞愈傷組織,通過(guò)誘導(dǎo)產(chǎn)生再生植株,并檢測(cè)證實(shí)該基因是否表達(dá)及其它相關(guān)基因的表達(dá)狀況,為培育出低木質(zhì)素的轉(zhuǎn)基因挪威云杉新品種奠定物質(zhì)和理論基礎(chǔ).以轉(zhuǎn)基因亞系A(chǔ)78-3、A78-4、A78-5和未轉(zhuǎn)基因?qū)φ誂95∶88∶22的細(xì)胞愈傷組織為實(shí)驗(yàn)材料,以DKM和LP-M熟化培養(yǎng)基培養(yǎng)五周后,再以1/4SH萌發(fā)培養(yǎng)基培養(yǎng)四周,成功地誘導(dǎo)形成了胚胎,并再生成新的小植株,萌發(fā)成

2、活率達(dá)到80﹪.從繼代培養(yǎng)的愈傷組織和再生小植株中分別分離總RNA,經(jīng)RT-PCR檢測(cè)反義ccr目標(biāo)基因的表達(dá)情況.結(jié)果顯示:在愈傷組織和再生小植株中,A78-3和A78-4兩個(gè)亞系都有很明顯的反義帶,但A78-5沒(méi)有出現(xiàn)反義帶,從而證實(shí)了A78-3和A78-4兩個(gè)亞系的反義ccr基因已經(jīng)在愈傷組織和再生小植株中都得到了成功的整合和表達(dá),而A78-5則沒(méi)有表達(dá).選擇384個(gè)與木質(zhì)素生物合成及植物生理代謝和環(huán)境適應(yīng)性有關(guān)的基因或cDNA片