t-PA基因對黃瓜的遺傳轉化及其在不同植物中的表達效率分析和密碼子改造.pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文tPA基因對黃瓜的遺傳轉化及其在不同植物中的表達效率分析和密碼子改造姓名：柏錫申請學位級別：碩士專業(yè)：植物學指導教師：朱延明2003.5.1東北農(nóng)業(yè)大學理學碩士學位論文①通過對比三種外植體(子葉、子葉節(jié)、下胚軸)的分化率，得出最佳外植體類型為子葉節(jié)；②通過探討PGR(NAA、6BA)濃度和配比對不定芽分化的影響，得出最佳芽誘導培養(yǎng)基為：MSlmg／L6BA(pus8)；(2)黃瓜遺傳轉化①通過探討Km濃度對不定芽

2、分化率的影響，確定Km篩選濃度為30mg／L。②以LBA4404(pBET)對黃瓜的遺傳轉化，得到56棵抗性植株(抗性芽率25O％)。③以LBA4404(pBEMT)對黃瓜的遺傳轉化得到59棵抗性植株(抗性芽率335％)。3抗性植株的分子生物學檢測(1)PCR檢測轉化tPA基因的抗性植株32株，得到12株PCR陽性植株，陽性率為375％。檢測轉化mtPA基因的抗性植株36株，得到18株PCR陽性植株，陽性率為500％。12)Southe

3、rnblot檢測了3株轉化mtPA基因的植株，得到l株Southernblot陽性植株，并且為單拷貝整臺。4植物密碼子分析和tPA表達預測(1)合作編寫了生物密碼子分析軟件CODONANALYSE。(2)檢索了馬鈴薯、黃瓜和草莓編碼蛋白基因eds序列，進行密碼子用法分析，獲得了3種植物密碼子用法表和高表達優(yōu)越密碼子。(3)根據(jù)CBI值預測了tPA基因在3種植物中的表達情況，結論是原始tPA基因適合在草莓中表達，在馬鈴薯和黃瓜中表達較低。