36679.生長抑素基因工程天然及免疫鼠源單鏈抗體庫構(gòu)建研究_第1頁
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文檔簡介

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文生長抑素基因工程天然及免疫鼠源單鏈抗體庫構(gòu)建研究姓名：張穎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：楊利國龔炎長20080601華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2008年碩士學(xué)位論文AbstractPhagedisplayantibodylibrarytechnologyhasbeenwidelyusedinthediagnosisandtreatmentofdisease，andfunctionalproteinexpr

2、ession，whichgaveitabrightprospectinthedevelopmentofimmunoassaySomatostatin(SS)consistingof14aminoacidresidesisoneofthemostimportantneuropeptidessecretedfromhypothalamusnucleus，whichinhibitsthesecretionofgrowthhormone(GH)

3、andresultsindepressionofthegrowthandlactationSShasbeenconsideredakeyendocrinehormoneinphysiologicalregulationofanimalsproducedformeatandmilkpurposeTherefore，itisimportanttoestablishtheimmunoassaymethodsandtechniquesforst

4、udyonthegrowthregulationmechanism，andfordevelopmentofnewtechniquestopromotegrowthandlactationTherehavebeenfewreportsaboutmicromoleculesinglechainrecombinationmonoclonalantibodiesSOfarFurthermore，therehavebeenrieportsabou

5、tselectionofScFvsagainstsomatostatinbyphagedisplaytooSSwascoupledwithbovineserumalbium(BSA)toobtain觚artificialSSantigenwhichwasusedtoimmunizedmiceSpleenswereobtainedfrombothnon—immunizedandartificiallyimmunizedmiceanduse

6、dtoextractandpurifyRNArespectivelyTwosourcesofRNAwereusedtoamplifyantibodygenesforthenaturalandimmunelibraryrespectivelyTwoScFvlibrarieswereconstructedviaphagedisplaytechniquewithtwosourcesofRNAThemainresultsaleshownasfo

7、llows：1ImmunogensynthesisandanimalimmunizationThehaptensomatostatinwascoupledwithBSAtomakeacompleteantigenSSBSAbythecarbodiimideactivationTheBalb／cmicewereimmunizedwithSSBSAseveraltimesuntilthetiterofantibodiesreachedto1

8、／25602TheobtainningandsplicingofimmunoglobulinvariablegenesThecompleteRNAWasextractedfromspleencellsofnonimmunizedmiceandtheimmunizedmicewiththehighestantibodytitersUsingtheRTPCR，immunoglobulinvariableheavychainregiongen

9、es(Vii)andvariablelightchainregiongenes(VL)，whichwereabout360bpand340bprespectively，werefirstamplifiedTheapproximatelysamemoleofVHandVLgenespurifiedwerejointedtogetherthroughsplicingbyoverlapextension(SOE)，usingthefragme

10、ntscontainingpartsofthelinkerinimmunesinglechainantibodylibraryconstructionThesinglestrandDNAWasamplifiedviaasymmetryPCRfornaturalsinglechainantibodylibraryconstructionThesinglechainfragmentvariablegeneswereabout750bpgen

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