31252.沙門氏菌多聚磷酸激酶介導campcrp調控rpos及氧化壓力應答

1、中國科學技術大學博士學位論文沙門氏菌多聚磷酸激酶介導cAMPCRP調控rpoS及氧化壓力應答姓名：程園園申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：孫寶林20090501摘要改變是由于侈舔對勛壓的調控導致的。鑒于細胞內還有另一種過氧化氫酶編碼基因，婦酊。我們監(jiān)測了勉酊表達，在排除了婦酊表達變化的情況下，可以推斷，礎負調控p舔的表達，最終導致抗氧化能力的改變。進一步的研究著力于發(fā)現(xiàn)礎是通過何種途徑影響印舔的轉錄，其中涉及哪些中間

2、因子。在我們觀測的若干個因子中發(fā)現(xiàn)，礎敲除后印的表達上升，因此可能影響到細胞內重要的信號系統(tǒng)c伽CI沖復合物的濃度。為了驗證礎敲除后，細胞內的c創(chuàng)帥CRP復合物濃度的變化是否與印的表達變化一致。我們敲除印以基因，它編碼胞內主要負責降解c舢皿的酶。比較c伽舊CRP下游基因在野生型、艘七缺失株和印刎缺失株中表達，證實礎敲除導致胞內cAMPCI沖濃度的升高。生物信息學預測在p嘏的啟動子區(qū)域有兩個可能的c√6山但CRP結合位點，但是一直未有直接

3、的實驗證據(jù)證明這一點。我們通過凝膠電泳阻滯實驗證明在印心的啟動子上的確有兩個CRP結合位點，并通過定點突變保守的CI沖結合堿基進一步確定了兩種的結合作用。然后，我們通過構建半乳糖苷酶報告質粒觀測堿基突變后，印舔啟動子的活性變化，證明c伽CRP是印心的轉錄激活子。因此，我們的研究顯示了印七可通過c√心口CRP負調控仞舔的表達，并且首次證明cAMPCRP可直接結合于印DS的啟動子并激活其表達。關鍵詞：多聚磷酸激酶、鼠傷寒沙門氏菌、印S、c舢