29439.阿維菌素和高溫脅迫對(duì)朱砂葉螨γ氨基丁酸及其受體表達(dá)的影響

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文阿維菌素和高溫脅迫對(duì)朱砂葉螨γ氨基丁酸及其受體表達(dá)的影響姓名：盧文才申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：農(nóng)藥學(xué)指導(dǎo)教師：何林20090501西南大學(xué)碩士學(xué)位論文其爬行速度都比較緩慢：AbR、從SS品系汰選的抗性個(gè)體SSA及其下一代SS—AFl個(gè)體相對(duì)于SS品系均表現(xiàn)為行動(dòng)遲緩(平均爬行速度分別為SS品系個(gè)體的623％、708％和764％)；經(jīng)藥劑誘導(dǎo)8h后，SS品系個(gè)體活動(dòng)速度明顯變慢(為誘導(dǎo)前7l％)，而抗性個(gè)體活動(dòng)速度變化不

2、顯著：HR品系和SS品系活動(dòng)速度相當(dāng)，無(wú)顯著差異；熱應(yīng)激后，SS和HR品系活動(dòng)速度均變得緩慢(爬行速度分別為熱激前的742％和701％)。體內(nèi)GABA含量較高的朱砂葉螨的活動(dòng)都受到不同程度抑制，從而間接驗(yàn)證GABA是無(wú)脊椎動(dòng)物的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)。四、分子克隆獲得一條GABA受體a亞基全長(zhǎng)序列，Genbank登錄號(hào)為EU362111，命名尺川億。開(kāi)放閱讀框(ORF)為1127bp，編碼376個(gè)氨基酸殘基，其中包括了由21個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽

3、。該基因編碼的氨基酸序列理論分子量為411kDa，等電點(diǎn)(pI)為925；57端有27bp的非編碼區(qū)，3’端有555bp的非編碼區(qū)和polyA尾，第1681處有AATAAA加尾信號(hào)：與其他昆蟲(chóng)、螨同源性搜索比較，發(fā)現(xiàn)與二班葉螨Tetranychusurticae、黑腹果粕rosophilamelanogasterGABA受體0【亞基同源性分別高達(dá)72％和71％。生物信息學(xué)分析表明，推導(dǎo)的R講n結(jié)構(gòu)也包含典型的GABA受體亞基的四個(gè)跨膜結(jié)

4、構(gòu)域，且第三結(jié)構(gòu)域至第四結(jié)構(gòu)域之間有一個(gè)明顯的親水區(qū)；尺∥。氨基酸序列中存在高度保守的糖基化位點(diǎn)僻∥。氨基酸序列92N和133N)與磷酸化位點(diǎn)餌∥。氨基酸序列187Y，341S，346Y，362Y)，另外還含有可能在螨類(lèi)中是特有的糖基化點(diǎn)(60NinR∥。)與磷酸化點(diǎn)(48Sand339SinRdlr。)；構(gòu)建分子進(jìn)化樹(shù)結(jié)果顯示，朱砂葉螨和二斑葉螨GABAR基因在GABAR類(lèi)群中最為原始，在進(jìn)化樹(shù)里獨(dú)立于其他物種的GABAR。采用同樣的

5、方法得到了室內(nèi)選育的朱砂葉螨AbR品系GABAR的基因序列對(duì)SS品系和AbR品系核苷酸及推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行對(duì)位排列分析，結(jié)果顯示，兩品系核苷酸與氨基酸序列沒(méi)有差異。五、建立了基于SYBRGreenI染料技術(shù)的realtimePCR方法，以13actin基因作為內(nèi)參基因進(jìn)行校正，運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)SS品系、AbR品系GABA受體mRNA表達(dá)量。檢測(cè)結(jié)果為AbR品系的相對(duì)表達(dá)量顯著低于SS品系的表達(dá)量(僅為SS品系的14％，P0，(1

6、5)，用SS品系LCso劑量的阿維菌素對(duì)朱砂葉螨AbR品系、SS品系誘導(dǎo)8h后，AbR品系GABA受體的表達(dá)量基本沒(méi)有變化，而SS品系表達(dá)量顯著降低(降為24％)，HR品系GABAR表達(dá)量顯著低于SS品系(前者是后者的547％)；熱激后，SS品系表達(dá)量顯著下降(降低了56，6％)，而HR品系表達(dá)量有所降低，但無(wú)顯著差異。朱砂葉螨GABA受體mRNA表達(dá)下調(diào)介導(dǎo)了其對(duì)阿維菌素和高溫脅迫的適應(yīng)性。關(guān)鍵詞：朱砂葉螨，阿維菌素，高溫，丫氨基丁酸