轉(zhuǎn)Bcl、Rip基因小麥后代的鑒定和遺傳分析.pdf

1、核糖體失活蛋白(ribosome-inactivating protein,Rip)是高等植物中廣泛存在的一種毒蛋白.它具有損傷真核細(xì)胞核糖體,從而抑制蛋白質(zhì)合成的功能.由于植物產(chǎn)生的這類毒蛋白對(duì)其他生物有毒害,因此認(rèn)為它們的功能是對(duì)自身的保護(hù)作用.Bcl-2是細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,名稱來(lái)源于B細(xì)胞白血病/淋巴瘤-2(B-cell leukemia/lymphoma-2,Bcl-2).它們通過(guò)調(diào)節(jié)跨膜的電化學(xué)梯度而對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行調(diào)節(jié),目前這

2、種基因在動(dòng)物上研究的比較多,在植物上報(bào)道的很少,它控制生物細(xì)胞在受到真菌侵染后迅速產(chǎn)生過(guò)敏性壞死,抑制真菌的的繁殖和擴(kuò)展.把這兩種基因?qū)胄←?可獲得抗病小麥新種質(zhì),在生產(chǎn)實(shí)踐中具有重要意義.該研究利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得了小麥轉(zhuǎn)基因植株,然后對(duì)轉(zhuǎn)基因植株中外源基因進(jìn)行連續(xù)幾代的跟蹤檢測(cè),選擇出了遺傳穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因株系.并對(duì)穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因株系做了抗病性鑒定.在對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化小麥的研究中發(fā)現(xiàn),小麥幼胚愈傷組織在受到農(nóng)桿菌侵染后,很難再進(jìn)一

3、步分化,小麥植株再生率很低.所以我們認(rèn)為幼胚的難再分化和小麥再生率低是限制轉(zhuǎn)基因成功的瓶頸.利用分子檢測(cè)技術(shù),對(duì)轉(zhuǎn)基因植株從T<,1>代到T<,3>代做了跟蹤檢測(cè),最終獲得了轉(zhuǎn)Rip穩(wěn)定遺傳株系3個(gè),轉(zhuǎn)Bcl穩(wěn)定遺傳株系2個(gè).對(duì)轉(zhuǎn)基因植株分析,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株中外源基因在T<,1>多為單拷貝,在穩(wěn)定遺傳的T<,2>代株系中多為雙拷貝.根據(jù)分子檢測(cè)檢測(cè),對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了遺傳分析,發(fā)現(xiàn)在T<,1>代選擇標(biāo)記基因nptⅡ和功能基因Rip的分離