15320.rgv脅迫下東北林蛙組織中nfkb及血液相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)變化

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號：S13385學(xué)位論文RGV脅迫下東北林蛙組織中NFKB及血液相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)變化指導(dǎo)教師姓名：申請掌位級別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：肖向紅教授碩士2013年4月東北林業(yè)大學(xué)周旋東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：生理學(xué)論文答辯日期：2013年6月授予學(xué)位日期：2013年6月答辯委員會主席：白秀娟教授論文評閱人：聾必符素大學(xué)摘要兩棲類在長期進(jìn)化過程中，形成了應(yīng)對多種微生物侵襲的免疫防御體系。核轉(zhuǎn)錄因子KB(NFKB)是參與

2、機(jī)體先天免疫的一類重要模式分子。研究該分子在病原微生物脅迫下的動態(tài)表達(dá)及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)變化對兩棲類免疫學(xué)的研究具有重要意義。方法：本研究選取東北地區(qū)兩棲類的代表物種東北林蛙(Ranadybowskii)為研究對象，以蛙類易感的蛙虹彩病毒(黝凇gryliovirus，RGV)為病原微生物，腹腔注射感染健康成年東北林蛙。選取注射RGV后05、l、2、4、8、12、16、24、48和72h的東北林蛙皮膚、肝臟、脾臟和血液組織作為實(shí)驗(yàn)材料

3、，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室高通量測序結(jié)果，設(shè)計NFKB1、NFKB2、IKB、TNFQ、VCAM、SOD和玳OS引物，利用SYBRGreenl熒光定量PCR技術(shù)，檢測NFKB1、NFKB2、IKB、TNFQ、VCAM、SOD和iNOS分子mRNA在各觀測時間點(diǎn)的表達(dá)水平，分析動態(tài)表達(dá)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：RGV脅迫后東北林蛙皮膚、肝、脾組織中NFKBI、NFKB2和IKB分子mRNA的表達(dá)量呈規(guī)律變化，從脅迫后的05h，NFKB1和NFKB2mRNA在三

4、個組織中都呈上調(diào)趨勢，分別在刺激后2h(肝臟)和4h(皮膚)快速上調(diào)至峰值；在脾臟中NFKB1和NFKB2上調(diào)趨勢緩慢，分別在16h(AjFKB2)和24h(NFKB1)達(dá)到峰值，三個組織中NFKB1的表達(dá)量均高于NFKB2。NFKB1和NFKB2表達(dá)至峰值后開始下調(diào)，并在gh(肝臟)和12h(皮膚)下調(diào)至初始水平，在脾臟中NF—KBI和NFKB272h才達(dá)到初始水平。IKB在受刺激初期表達(dá)量也立即下調(diào)，其上調(diào)時聞點(diǎn)與NFKB的上調(diào)時間

5、點(diǎn)基本相同，且IItB的表達(dá)量高于NFKB1和NFKB2。實(shí)驗(yàn)組與對照組之間存在顯著差異(P005)。以注射RGV的東北林蛙為實(shí)驗(yàn)組，同時給予NFKB抑制劑的東北林蛙為對照組，檢測血液中相關(guān)細(xì)胞因子TNFd、VCAM、SOD和iNOSmRNA的表達(dá)變化。結(jié)果表明，與對照組相比實(shí)驗(yàn)組各基因表達(dá)量顯著增加。TNFQ在脅迫48h表達(dá)量增加最顯著，是對照組的5倍；VC／k～t個時間點(diǎn)均顯著增加，其中2h表達(dá)量為對照組的60倍，96h恢復(fù)到正常水