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1、安徽碭山地區(qū)梨資源豐富,碭山酥梨在世界水果市場(chǎng)占據(jù)重要地位.由于梨遺傳背景復(fù)雜,種內(nèi)變化大,加上種間雜交,使碭山地區(qū)梨在長(zhǎng)期的進(jìn)化和栽培中形成了豐富的資源類型.對(duì)碭山地區(qū)梨種質(zhì)資源進(jìn)行研究,以達(dá)到合理利用這些資源,對(duì)加快梨育種進(jìn)程有重要意義.該試驗(yàn)調(diào)查并收集了碭山地區(qū)梨24個(gè)資源類型,進(jìn)行RAPD研究,主要結(jié)果如下:1、以CTAB法和SDS法提取了幼葉、成熟葉、韌皮部和芽中的DNA,通過(guò)純度、顏色、產(chǎn)率、電泳,擴(kuò)增結(jié)果等比較,認(rèn)為CTA
2、B法更適合梨基因組DNA提取.用幼葉提取的DNA,質(zhì)量好,產(chǎn)率高;成熟葉用改良CTAB法提取也可得到適于RAPD分析的DNA;韌皮部和芽用上述兩種方法提取,DNA產(chǎn)率均較低.2、用正交設(shè)計(jì)篩選出適合梨樹(shù)的RAPD反應(yīng)參數(shù)為:在25 μl反應(yīng)體系中,模板DNA 60ng、引物4pmol、dNTPs 5×10<'-9>mol、10×PCR Buffer 2.0 μl、MgCl<,2> 5×10<'-8>mol、Taq酶1.0U.3、運(yùn)用6個(gè)
3、引物的特異帶構(gòu)建出的梨DNA指紋圖譜,可區(qū)分14個(gè)生物型中的9個(gè).用8個(gè)引物的帶型組合構(gòu)建的指紋圖譜,可將這14個(gè)資源類型全部區(qū)分.4、從60個(gè)隨機(jī)引物中篩選出40個(gè)表現(xiàn)穩(wěn)定的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增.碭山地區(qū)梨種質(zhì)資源聚類分析表明,當(dāng)閥值為68.6~70.4時(shí),全部生物型可分為5類.第一類:碭山酥梨及其變異、鴨梨、雪花梨、萊陽(yáng)慈梨和紫酥,主要是白梨;第二類:新高、豐水、二十世紀(jì)、皇冠和蒼溪梨,除皇冠外,都為沙梨;庫(kù)爾勒香梨和紅香酥聚為一類;
4、伏酥和豆梨各為一類.5、逐步判別分析顯示,Fisher判別函數(shù)值只與引物S<,54> 1500bp,S<,58> 1375bp,S<,58> 947bp和S<,1461>831bp 4個(gè)位點(diǎn)有關(guān),判別函數(shù)為:Y<,1>=-27X<,1>+18X<,2>-18X<,3>+18X<,4>-19.609;Y<,2>=9X<,1>-3.60×10<'-15>X<,2>+3.597×10<'-15>X<,3>-3.60×10<'-15>X<,4>
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